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常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？

题目

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？

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相似问题和答案

第1题：

常用沉淀分离法有哪些？各自原理是什么？ 


正确答案: 盐析法：破坏蛋白质分子水化作用或者减弱分子之间的同性相互作用的因素，就可以降低蛋白质在水中的溶解度。
有机溶剂沉淀法：破坏水化膜、增加吸引力。
等电点沉淀法：在等电点时水化膜被破坏，分子间引力增加，溶解度降低。
高分子聚合物沉淀法：可使蛋白质水合作用减弱而发生沉淀
聚电解质沉淀法：絮凝剂   盐析和降低水化
不可逆的沉淀去除法：
（一）金属离子沉淀法
（二）有机酸沉淀法
（三）其他
表面活性剂沉淀法：形成络合物

第2题：

分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有哪些？它们的原理是什么？


正确答案: 分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有：离子交换色谱，疏水色谱，亲和色谱和凝胶过滤色谱；
离子交换色谱，以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子和交换剂上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法；
疏水色谱，利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异对蛋白质组分进行分离的色谱方法；
亲和色谱：利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质；
凝胶过滤色谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方法。

第3题：

层析法按原理分类有哪几种?各自分离依据是什么?


正确答案：

层析法按照原理可分为：

吸附层析：主要利用吸附剂对被吸附成分的吸附能力差异进行分离。

分配层析：主要利用被分离成分在两相不相混溶的溶剂中分配系数的差异进行分离。

离子交换层析：主要利用被分离成分对离子交换剂的亲和能力的不同进行分离。

电泳法：利用电流通过时，离子倾向性不同进行分离。

凝胶过滤色谱：利用凝胶对分子大小不同成分的阻滞作用不同而得到分离。

第4题：

试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。


正确答案: 串联亲和纯化（TAP），用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用，通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤：
（1）蛋白质标记：由蛋白A的IgG结合区（ProtA）和钙调蛋白结合区（CBP）构成，中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开；
（2）构建表达标记蛋白的细胞或组织：将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位；
（3）细胞抽提物的准备；
（4）串联亲和纯化；
（5）蛋白质复合体的鉴定。

第5题：

比较蛋白质的分离纯化技术中凝胶过滤和超过滤方法的原理。


正确答案:凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术，但是其原理和操作都不相同。凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小将样品中的各种蛋白质分子分开，具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的凝胶过滤柱，小分子的蛋白质进入凝胶孔内，大分子的蛋白质留在外面，然后用洗脱液洗脱，蛋白质依分子大小被洗脱，然后是小分子的蛋白质。超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质，具体操作是将样品装入透析袋，然后利用高压或离心力，迫使蛋白质样品中的非蛋白的小.分子溶质通过半透膜，蛋白质留在透析袋内。

第6题：

常用的蛋白质分离纯化方法有（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）等。


正确答案:离心；透析；沉淀；层析；电泳；蛋白印迹；蛋白质芯片；质谱法

第7题：

请以DEAE-C为例说明离子交换纤维素分离纯化蛋白质时的洗脱方法有哪些？并说出各种方法的洗脱原理。


正确答案:无论是升高环境的pH还是降低pH或是增加离子强度都能将被吸附物质洗脱下来。
（1）、升高环境的pH，使DEAE-C在此pH下不解离，从而不能吸附蛋白质而被洗脱下来。
（2）、降低环境的pH，使蛋白质在此pH下失去电荷，从而丧失与DEAE-C结合力而被洗脱下来。
（3）、用高浓度的同性离子根据质量作用定律将目的物离子取代下来。

第8题：

蛋白质分离分析技术常用的有哪几种？简述凝胶过滤、电泳基本原理。


正确答案: 常见分离技术：离心、盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、电泳、柱层析、透析等。
凝胶过滤原理：多聚糖具有大小不一的孔径，大分子在孔径中运动距离短，洗脱快，小分子路径长，洗脱时间长。
电泳原理：凝胶中存在电场效应和分子筛效应：电荷多，运动快；分子小运动快。

第9题：

酶联免疫吸附试验的原理是什么？常用的检测方法有哪几种？


正确答案:ELISA的原理是用酶标记的抗体进行的抗原抗体反应，它将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，是抗原抗体反应在固相表面进行，通过洗涤将固相上的抗原抗体与液相中的游离成分分开。基本方法：1.双抗体夹心法；2.间接法；3.BSA-ELISA（生物素-亲和素系统）；4.酶联免疫斑点试验ELISPOT；5.免疫组化技术。

第10题：

测试技术常用的方法有哪几种？各自的特点是什么？


正确答案: 有机械法、声测法、光测法和非电量的电测法。
机械法：结构简单，工作稳定，价格便宜，方法容易掌握，但精度低，不能远距离操作；声测法的特点是无损检测，试样可重复使用，对测量范围的岩石进行定性分析，结构判断，缺点是设备较复杂，对物理力学性质等难以定量分析；光测法的特点是结果直观，工作稳定，抗干扰能力强，价格便宜，但精度低，遥测困难；电测法的特点是精度高，速度快，劳动强度低，可实现遥测和自动化，缺点是设备复杂，维修成本高，易受干扰等。

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