简述快速氯化铯密度梯度离心法提取分离大质粒DNA的原理。

题目

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第1题：

Ficoll分层液法是-种

A.聚合物加速分离法

B.聚合物非加速分离法

C.多次密度梯度离心分离法

D.单次密度梯度离心分离法

E.连续密度梯度离心分离法

正确答案：D
Ficoll分层液法主要用于分离外周血中单个核细胞，是-种单次密度梯度离心分离法。

第2题：

用Ficoll分层液分离外周血中的单个核细胞，是一种

A、聚合物加速沉淀分离法

B、聚合物不加速沉淀分离法

C、多次密度梯度离心分离法

D、单次密度梯度离心分离法

E、连续密度梯度离心分离法

参考答案：D

第3题：

简述碱溶酸沉法提取分离香豆素类化合物的原理及应该注意的问题。

正确答案：香豆素类化合物具有内酯环结构,碱性条件下可水解开环,生成顺式邻羟基桂皮酸的盐溶于水,在酸性条件下又闭环恢复为内酯环结构.但如果遇碱液长时间加热,开环结构将遭到破坏,异构化为反式邻羟基桂皮酸衍生物,此时,再也不可能环合为内酯.因此在提取香豆素时,要注意温度的控制、加热时间的长短且碱度不宜过高.

第4题：

试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。

正确答案: 质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。
碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。
煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，Triton X-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。
S.DS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。

第5题：

Ficoll的分离原理是

A、磁性吸附

B、抗原抗体免疫学反应

C、单次差速密度梯度离心分离法

D、透析

E、层析

参考答案：C

第6题：

淋巴细胞类型鉴定的实验方法是( )。

A、免疫荧光法、磁珠分离法、陶选法

B、磁珠分离法、陶选法、密度梯度离心法

C、流式细胞术、密度梯度离心法、磁珠分离法

D、免疫荧光法、磁珠分离法、密度梯度离心法

E、密度梯度离心法、流式细胞术、陶选法

正确答案：A

第7题：

常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括

A、α互补筛选

B、插入失活筛选

C、杂交筛选

D、质粒的小量快速提取

E、DNA序列测定筛选

参考答案：D

第8题：

Percoll分离液法是一种

A、聚合物加速沉淀分离法

B、磁铁吸引法

C、多次密度梯度离心法

D、单次密度梯度离心法

E、连续密度梯度离心法

参考答案：E

第9题：

简述质粒的DNA特性。

答案：

解析：

(1)质粒的复制:质粒DNA在细菌中的复制有两种,一种是严紧型质粒的复制,它们的复制与细菌的繁殖密切相关;另一种是松弛型质粒复制,能在没有蛋白质合成的情况下继续复制。(3分)(2)质粒的不相容性:是指细菌质粒不能在相同细胞中同时存在的现象。(3分)(3)质粒的转移性:在自然条件下,许多质粒都可通过细菌结合的作用,将质粒复制子转移到新的宿主菌内。(2分)(4)质粒中的选择性标记:常用的选择性标记是抗生素抗性基因。(2分)

第10题：

下列哪个选项是错误的（）。

A、等密度梯度离心是用于大小相同密度不同的物质的分离
B、等密度梯度离心是用于密度相同，大小不同的物质的分离
C、等密度梯度离心长用来分离提取核酸，亚细胞器和质粒

正确答案:B

简述快速氯化铯密度梯度离心法提取分离大质粒DNA的原理。

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