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简述植物次生代谢物分离和纯化的步骤。

题目

简述植物次生代谢物分离和纯化的步骤。

参考答案和解析
正确答案: 细胞破碎
次生代谢物的提取
次生代谢物的分离
浓缩与干燥
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第1题：

（）基因工程药物的分离纯化一般不应超过5个步骤，包括（）；（）；（）；（）和（）。


正确答案:细胞破碎；固液分离；浓缩与初步纯化；高度纯化；成品加工

第2题：

简述提高植物次生代谢物含量的方法？


正确答案:1）细胞种质影响：选择次生产物含量高和合成次生物质部位的细胞为培养对象。
2）选育高产细胞系
直接筛选法：对物种的愈伤组织培养物多次进行比较，选择出次生代谢产物含量高、生长良好的细胞系   诱变法：利用射线对愈伤组织进行诱变，再进行平板培养，进而筛选出次生代谢产物含量高的细胞系。   基因工程细胞株：关键酶 转录因子
3）培养基
生长培养基  高激素  低胁迫 生产培养基  低激素   胁迫
4）二阶段培养法：二阶段法连续培养可以提高次生产物含量
5）两相法培养：该法可减轻产物本身对细胞代谢的抑制作用，并可保护产物免受培养基中催化酶或酸对产物的影响。此外，由于产物在固相或疏水相中的积累简化了下游处理过程，所以，可大幅度降低生产成本。
6）固定化培养：利于细胞组织化，可提高次生代谢产物含量。
7）培养基成分：一般地说，提高碳、氮、硝酸盐、钾和磷酸盐的浓度倾向促进细胞快速生长，而耗尽时，强烈地刺激次级生代谢。
其中磷酸盐影响最大，开始时降低磷酸盐水平，可强烈促进次生代谢产物产生，这可能是低能荷解除了对次生代谢的抑制作用
8）植物生长调节剂：生长素、细胞分裂素、赤霉酸（GA），脱落酸（ABA），乙烯能有效地触収次生代谢。因为植物细胞培养中，次生代谢物的产生是细胞增殖及分裂的凼数，对次生代谢物有较大影响。
9）植物细胞大规模培养方式
悬浮培养法（主要） 半连续培养法 连续培养法 分批培养法 固定化培养法
10）环境因素的影响
A.光（光照时间、光质及光强）：如烟草细胞培养物连续暗处理，其尼古丁含量高于连续光照处理； 黄酮醇葡萄糖苷合成对波长在320毫微米以下的紫外光敏感，照射后光敏色素系统激収次生代谢途径。
B.温度：温度影响细胞的生长，一般植物细胞于20℃～32℃培养时良好，应根据不同的植物材料和生理代谢要求，选择合适温度
C.搅拌和通气：搅拌过慢减少气体交换量，影响呼吸代谢，过快易破坏细胞。
11）前体饲喂：在植物细胞培养中加入次生代谢物生物合成的前体，是提高次生代谢物产量的有效途径。
12）诱导子：诱导子是一种能引起植物过敏反应的物质，由于它在不植物的相互作用中，能快速、高度与一和选择性的诱导植物特定基因的表达，进而活化特定次生代谢途径，积累特定的目的次生代谢物，所以可以利用它来提高植物次生代谢产物的产量.

第3题：

简述EPA和DHA的分离纯化工艺线路。


正确答案: 二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。
碎鱼或鱼下脚料粉碎→7℃与淀粉混合→己烷提取→己烷提取液用氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠脱水→回收己烷→粗制鱼油→加1mol/LKOH乙醇溶液20℃回流6h→离心→脂肪酸钾盐皂化物→加乙醇和尿素70℃搅拌10min，饱和、低不饱和脂肪酸与尿素生成结晶→冷却过滤→50%EPA和DHA滤液→多级分子蒸馏或减压蒸馏→≥95%EPA和DHA。

第4题：

简述生物分离纯化技术的概念


正确答案: 以生物物质原料为基础，对目标产物进行提取、纯化、加工制备的生产技术。

第5题：

利用植物细胞培养技术生产次生代谢物的优点？


正确答案: 1、代谢物生产是在人工控制的条件下进行的，不受季节和地域限制
2、减少占用耕地，保护资源和环境
3、在无菌条件下进行，排除病菌和害虫干扰
4、快速、高效

第6题：

某种植物向环境中释放次生代谢物，排斥其它植物生长的现象称为（）。

  • A、他感作用
  • B、抑制作用
  • C、竞争
  • D、领域性

正确答案:A

第7题：

多数的次生代谢物位于细胞内部，提取前需先进行植物细胞破碎。


正确答案:正确

第8题：

如何纯化分离的植物原生质体并鉴定其活力？


正确答案: （1）原生质体的纯化
①沉降法：应用原生质体的比重大于溶液的性质而使原生质体沉于底部。
②漂浮法：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮于液体表面。
③梯度离心法：选两种不同渗透浓度的溶液，其中一种溶液密度大于原生质体的密度，另一种溶液小于原生质体的密度。
（2 原生质体活力的测定
①形态识别：形态上完整，呈圆形，含有饱满的细胞质，颜色鲜艳的即为存活的原生质体。
②染色识别
1、0.1%酚番红或Evans蓝染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。
2、双醋酸盐荧光素（FDA）染色法：在荧光显微镜下有荧光的即为有活性的原生质体。

第9题：

简述生物分离纯化技术的原理和特点


正确答案: 基本原理：利用混合物中不同组分间物理、化学和生物学性质的差别来实现组分间的分离或纯化。
技术原理：选用能够识别这些差别的分离介质或扩大这些差别的分离设备来实现组分间的高效分离。
特点：
⑴环境复杂、分离纯化困难含量低、工艺复杂；
⑵稳定性差、操纵要求严格；
⑶目标产物最终的质量要求很高；
⑷终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同 ⑸  终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同。

第10题：

分离纯化的主要操作步骤。


正确答案:细胞分离（离心、传统过滤和膜过滤。）； 细胞破碎和碎片分离（均质法和高速玻璃珠研磨法，离心法和双水相提取法）；浓缩（超滤-----错流系统）；色谱分离

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