凝胶层析分离机理

题目

凝胶层析分离机理

参考答案和解析

正确答案: 利用凝胶粒子为固定相，依据筛分原理，根据料液中溶质分子的相对分子质量进行分离。

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第1题：

A.凝胶层析
B.硅胶分配层析
C.聚酰胺层析
D.纸层析
E.离子交换层析

分离黄酮类化合物多采用

答案：C

解析：

第2题：

DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。

正确答案: 在碱性环境下，核酸分子带负电荷，在外加电场的作用下，分子在凝胶多孔性刚性滤孔中从负极向正极泳动，其中主要由于分子筛效应和电荷效应达到分离不同大小核酸分子的目的。

第3题：

ELISA采用

A.凝胶层析分离

B.活性炭吸附分离

C.磁颗粒分离

D.PEG沉淀分离

E.聚苯乙烯吸附分离

参考答案：E

第4题：

简述凝胶层析分离的定义及原理

正确答案: 定义：凝胶层析又称为凝胶过滤，分子排阻层析，分子筛层析等。指以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离的一种层析技术。
原理：凝胶层析柱中装有多孔凝胶，当含有各种组分的混合溶液流经凝胶层析柱时，大分子物质由于分子直径大，不能进入凝胶的微孔，只能分布于凝胶颗粒的间隙中，以较快的速度流过凝胶柱。较小的分子能进入凝胶的微孔内，不断地进出于一个个颗粒的微孔内外，这就使小分子物质向下移动的速度比大分子的速度慢，从而使混合溶液中各组分按照相对分子质量由大到小的顺序先后流出层析柱，而达到分离的目的。

第5题：

各种色谱分离（共价、聚焦色层分离、凝胶过滤、亲和）的机理是什么？

正确答案:（1）共价作用色层分离法：是利用溶质分子与层析剂凝胶之间的共价吸附作用将目的产物与其他溶质分子分离开来的一种层析方法。首先要制备层析剂，具有共价反应活性的二硫键层析剂可用葡聚糖凝胶或琼脂糖胶作材料制得，有谷胱甘型二硫键层析剂和巯基丙基型二硫键层析剂等。
（2）聚焦色层分离法：利用蛋白质分子或其他两性分子等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离纯化。两性物质如蛋白质等混合物上好样后，用洗脱缓冲液淋洗，蛋白质随其下移至各自的等电点聚焦，移动速度明显减缓，最后按等电点顺序流出柱外。
（3）凝胶色谱：以凝胶为固定相，根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术，因而又称为分子筛色谱、空间排阻色谱或尺寸排阻色谱。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构的物质，凝胶每个颗粒的微细结构如一个筛子。
（4）亲和色谱作为色谱分离的一个分支，对生物大分子化合物的分离纯化具有特别重要的意义。众所周知，生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性。把与目的产物有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，当含有目的产物的混合物（流动相）流经此固定相时，即可把目的产物从混合物中分离出来。

第6题：

A.大孔吸附树脂层析
B.聚酰胺吸附层析
C.离子交换层析
D.纤维素层析
E.凝胶层析

分离多糖混合物用（）。

答案：E

解析：

⒈ 离子交换树脂可以用于分离小分子物质如氨基酸、腺苷、腺苷酸等。　⒉ 分离多糖混合物用凝胶层析。商品凝胶的种类很多，常用的是葡聚糖凝胶和羟丙基葡聚糖凝胶。

第7题：

简述鱼糜制品凝胶化和凝胶劣化的机理？

正确答案:1凝胶化：构成肌原纤维的粗丝和细丝由于盐溶作用而溶解，在溶解中二者吸收大量水分并结合形成肌动球蛋白的溶胶。肌动球蛋白被加热时，其高级结构发生松散，分子间通过氢键相互缠绕形成纤维状大分子而构成稳定的三维网状结构，由于肌球蛋白在溶出过程中具有极强亲水性，因而在形成的网状结构中包含了大量的水分，在加热时，网状结构中的自由水被封锁在网目中不能流动，形成具有弹性的凝胶状物。
2.凝胶劣化：一种假说：鱼肉水溶性蛋白质中存在着一种温度超敏感碱性蛋白酶，60℃时活性最强，可使已形成的肌动球蛋白分子网状结构破坏，疏水基团暴露，导致水分游离而使凝胶劣化。

第8题：

A.凝胶层析
B.硅胶分配层析
C.聚酰胺层析
D.纸层析
E.离子交换层析

分离氨基酸多采用

答案：E

解析：

第9题：

纯化标记物的方法中利用分子筛效应与电荷效应的是（）

A、PAGE法
B、HPLC法
C、凝胶过滤法
D、离子交换层析法
E、柱层析分离纯化

正确答案:A

第10题：

商品果胶按酯化度分类及凝胶形成的条件和机理。

正确答案: （1）商品果胶是用酸从柑橘皮和苹果皮或苹果渣中提取得到的可溶性果胶。根据果胶分子羧基酯化度的不同，天然果胶一般分为两大类：一类为高甲氧基果胶（HM），甲氧基含量>7%，酯化度（DE）>50%；一类为低甲氧基果胶（LM），甲氧基含量<7%，酯化度（DE）<50%。
（2）果胶形成凝胶的条件：HM果胶形成凝胶的条件是可溶性固形物含量（一般是糖）超过55%，一般是60~65%，pH2.0~3.5；LM果胶形成胶凝的条件是必须有多价阳离子（如Ca²⁺、Al³⁺）存在， pH2.5~6.5，固形物10％~20%。
（3）果胶形成凝胶的机理：HM果胶溶液必须具有足够的糖和酸存在才能凝胶，当HM果胶溶液pH值足够低时，羧酸盐基团转化成羧酸基团，分子不再带电，分子间斥力下降，导致水合程度降低，分子间缔合形成凝胶；LM果胶必须在多价阳离子（如Ca²⁺、Al³⁺）存在下形成凝胶，其胶凝的机理是二价阳离子能加强果胶分子间的交联作用，不同分子链的均匀区间形成分子间接合区。

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