动物转基因常用的外源基因导入方法有哪些？各有何优缺点？

题目

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相似问题和答案

第1题：

改变水泵性能曲线的常用方法有哪些？各有何优缺点？

正确答案: 1、改变离心泵的转速：操作方便，调压范围较大，并能实现自动调节，但系统比较复杂，投资大；
2、切削叶轮外径：最简单方便，投资最少，但只能满足一定工况点，对压力频繁变化的供水单位不太适用；
3、液力耦合器调速：启动平稳，有进载保护和无级调速作用，操作方便，适用工况经常变化的供水，但存在一定的功率消耗。

第2题：

转基因是将（）导入受体细胞的过程。

A、外源蛋白
B、细菌
C、外源氨基酸
D、外源基因

正确答案:D

第3题：

可用于鉴定转基因动物基因组内是否整合了外源基因的方法是( )

A、Southernblotting

B、Northernblotting

C、Westernblotting

D、RT-PCR

E、EMSA

参考答案：A

第4题：

转基因动物常用的方法有：（）、（）、（）。

正确答案:逆转录病毒感染法；DNA显微注射法；胚胎干细胞法

第5题：

常用的外源基因导入受体细胞的方法有（）（）（）

正确答案:化学法；电击法；显微注射法

第6题：

转基因产品食用安全评价的动物试验有哪些？各有什么作用？

正确答案: 按照个案分析的原则，根据需要，目前在食品安全评价中所使用的动物试验都可用于转基因产品食用安全评价，最常用的有急性经口毒性试验、亚慢性毒理学试验、过敏性动物试验等。急性经口毒性试验可选择大、小鼠的急性经口毒性试验，主要是针对转基因表达的目标物质（通常是蛋白质），按剂量分组，短时间内经口灌胃给予目标物质，在高剂量组尽可能给予更多的目标物质，观察受试物对大、小鼠是否有急性毒性作用，同时可以得到最低有作用水平或最大无作用水平，为风险性分析中的暴露量计算提供依据。
在食品安全评价中，通常还要考虑到安全系数（不确定系数）。将动物实验的结果外推到人体一般都采用100为安全系数，其中个体间的差异为10，种属间的差异也为10。以转基因抗虫水稻为例，其转基因表达的目标物质是抗虫蛋白，用抗虫蛋白进行大鼠的急性经口毒性试验，得到抗虫蛋白的最大无作用水平为每公斤体重5克，从成分分析得到每公斤转基因抗虫水稻含有2.5毫克抗虫蛋白，按50公斤体重者每天食用1公斤大米计算，其安全系数为100000。
亚慢性毒理学试验可以反映出转基因食品对于生物体的中长期营养与毒理学作用，因此是转基因食品食用安全性评价工作的重要评价手段之一。通常选择90天大鼠喂养试验。在评价方法上，在不影响动物膳食营养平衡的前提下，按照一定比例（通常设高、中、低三个剂量组）将转基因食品掺入到动物饲料中，让动物自由摄食，喂养90天时间。将转基因食品与非转基因食品及正常动物饲料组的各项指标进行比较，观察转入基因是否对大鼠产生了不良的营养学与毒理学作用。
过敏性动物试验主要是利用豚鼠等敏感动物建立鼻炎、哮喘等模型，通过与阴性和阳性对照物比较，来研究转基因产品等待测物的过敏原性即潜在的致敏性。通过采用统计学检验不同动物分组之间的差别，来判断转基因产品等待测物的过敏原性的有无与高低。

第7题：

外源基因导入植物的方法主要有哪些？

正确答案: 物理方法：电击法、基因枪法（biolistiC.、显微注射法、微激光束法
化学方法：PEG介导法、脂质体介导法
生物学方法：农杆菌介导法、花粉管通道法

第8题：

试述转基因技术中外源基因的导入的常用方法及其优缺点。

正确答案: （一）显微注射法
（1）利用注射仪把外源DNA直接注入动物卵母细胞、受精卵、早期胚胎、胚胎干细胞、或体细胞的转基因方法。
（2）优点：可准确导入外源基因，转化频率高，鱼体内可达20%，不需载体，直接获得纯系，实验时间短。
（3）缺点：仪器贵重，操作繁琐耗时，一次处理卵很少。
（二）电穿孔转化法
（1）利用高压电脉冲作用，使细胞膜上产生可逆的瞬间通道，从而促进外源DNA的有效导入。电穿孔转化法的效率受电场强度、电脉冲时间和外源DNA浓度等参数的影响。
（2）优点：操作简单，同时处理大量受精卵。
（3）缺点：导入是随机的、无定向的，转移率低。
（三）精子介导法
（1）精子同外源DNA共浴后再给卵子受精，使外源DNA通过受精过程进入受精卵并整合于受体的基因组中。
（2）优点：简便，成本低，便于大量筛选，是近几年转基因动物研究的热点。
（3）缺点：处理后精子的受精能力差异较大、阳性率低、转移不稳定。
（四）基因枪转化法
（1）又称微弹轰击转化法，以高压气体为动力，利用高速运行的金属颗粒轰击细胞，将包裹在金属颗粒表面的外源DNA分子随金属颗粒送入细胞的转化方法。
（2）优点：该法简单快速，接触面积大、转化率高，可同时处理多个个体。
（3）缺点：不稳定，表达方面存在问题。
（五）病毒（噬菌体）颗粒转导法
用病毒（噬菌体）DNA（或RT-DNA）构建的克隆载体或携带目的基因的克隆体，在体外包装成病毒（噬菌体）颗粒后，感染受体细胞，使其携带的重组DNA进入受体细胞。
转基因病毒具严格的宿主特异性，且鱼类转基因病毒的分析手段非常落后，此法对鱼类暂不适应。
（六）组织注射法
将外源基因直接向机体组织注射，周围组织能将外源基因纳入，并且注入的外源基因能被整合。

第9题：

转基因生物的外源基因检测方法有哪些？

正确答案: （1）形态标记。形态标记是指在杂种后代中那些可被直接观察到的性状，如植株的茎、叶、穗、籽粒各部分大小、色泽、形状及抗病性表现等。这是检测外源基因最常用的、也是最直观的方法。一般是参照双亲的特征，根据杂咱后代的表现情况，来确定杂种后代中是否有外源基因导入。
（2）细胞标记。细胞标记，即细胞学鉴定。通过对染色体的数目和形态特征观察、染色体带型和核型分析以及减数分裂染色体配对行为的观察，来检测外源基因。这是检测外源基因最基本、最经典的方法。
具体包括：
A.杂种细胞学，观察通过对杂种体细胞染色体观察，统计其染色体数目，并结合花粉母细胞减数分裂中期染色体配对行为观察，来确是否有外源基因导入。通过染色体计数和配对行为观察，很容易确定双二倍体、部分双二倍体、附加系、单体、缺体、端体等染色体的数目和类型。利用有无随体染色体，也可鉴定外源基因。
B.核型及核型分析，核型通常是指体细胞染色体所有可测定的表型特证的总称。核型分析就是对核型的各种特征进行定量或定性的表达。核型分析的染色体，一般以体细胞分裂中期的染色体作为基本形态。在核型分析的表述格式中，一般包括染色体数目和染色体形态特征，形态特征主要包括相对长度、臂比、着丝点位置和随体的有无。染色体的分类目前采用应用最广泛的两点四区系统，我国于1984年第一届全国植物染色体学术讨论会上稍加修改后推行。根据臂比值将染色体分为正中部着丝点（M）、中部着丝点区（m）、近中部着丝点区（sm）、近端部着丝点区（st）、端部着丝点区（t）和端着丝点（T）即所谓的两点四区。
C.染色体分带，染色体分带技术是通过一定的碱、酸、盐、温度等因素对染色体进行处理，借助Giemsa等染料染色，使染色体在一定部位呈现深浅程度不同的染色区段而形成特定的带纹，由于其带纹在各染色体上显示的位置、宽窄、大小、数目、浓淡等具有相对的稳定性，故可用来进行染色体的鉴别和分析。
（3）生化标记。生化标记是利用电泳等技术对生物大分子，如蛋白质、酶等进行鉴定。因为蛋白质是由基因编码的，特定的基因型决定了蛋白质的特定组成，因此，不同种、属所特有的蛋白质组成能够反映出该种、属的基因型。
具体包括：
A、贮藏蛋白分析法，按其溶解特性可分成谷蛋白和醇溶蛋白两大类，其蛋白的亚基存在着丰富的变异类型，不受环境条件影响而能稳定遗传。
B、同工酶分析法，同工酶是结构不同但功能相同的一类酶。在一定条件下电泳染色，同一遗传材料可同时显示几条酶带，而不同的遗传材料可具有不同的酶带。同工酶是基因的直接产物，是基因表达的结果。
（4）分子标记。分子标记是继形态标记、细胞标记、生化标记之后的一种新的分子遗传标记方法，它是以DNA多态性与性状间的紧密连锁关系为基础的遗传标记，能够稳定遗传，且遗传方式比较简单，是性状基因的真实反映，能在不同发育阶段对不同组织DNA进行检测分析。目前，用于检测小麦外源基因的分子标记主要有限制性片段长度多态性（restriction fragment length length polymorphism 简称 RFLP）、随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA 简称 RAPD ）和基因组原位杂交（genomic in situ hybridization 简称 GISH）。这项新技术越来越受到重视，特别是在检测外源小片断染色时更是倍受青睐。
具体包括：
A、RFLP，RFLP技术是基于不同物种、不同材料间基因组DNA的限制性内切酶识别位不同的原理，通过对基因组DNA经特定的限制性内切酶消化，产生不同大小的DNA片断，经电泳后转移到固定支撑物上，用特定的放射性标记的DNA片断（探针）杂交检测多态性。它是检测不同物种个体间基因细微差异的可靠手段，标记的数量较大，呈简单的孟德尔显性遗传。RFLP是较早应用于植物基因标记的一项分子标记技术。
B、RAPD，RAPD技术是基于聚合酶链式反应原理，通过运用不同核苷酸序列的随机引物（通常为10个碱基）对基因组DNA进行扩增，对扩增产物进行电泳寻找多态性标记。这类标记通常也是显性遗传，由于它在技术上非常简单，也无需对基因组序列有多少了解，只要合成一套随机引物就可用于作物物种，因而应用最为广泛。RAPD技术最大的缺点是稳定性差，易受不同药品的影响。为了提高该标记的稳定性和重复性，有必要将RAPD技术转化为特异序列扩增的SCAR(Sequence characterized amplified region )标记。即将RAPD作为初步筛选鉴定的一种方法，一旦发现所需的DNA扩增产物之后，再用特异序列扩增的方法，将RAPD转变成经典的PCR方法。
C、FISH，这是一项利用标记的DNA探针与染色体上的DNA杂交，在染色体上直接进行检测的分子标记技术。该项技术在研究内容，研究方法上将传统的细胞遗传学与现代分子遗传学结合起来，形成一门新的交叉学科――分子细胞遗传学。制作良好的染色体分裂相片子是该技术的关键。其最大优点是利用普通的显微镜，可以直接鉴定到所要研究的基因在染色体上的位置和分布。
总之，形态标记、细胞标记、生化标记和分子标记是检测外源基因重要的遗传标记形式。形态标记检测方法简便易行，提供直接的结果，但标记数少、多态性差、易受环境条件影响。 •细胞标记检测是最经典的方法，但工作量大，费人才。生化标记检测设备简单，试剂价格低廉，但标记数目有限。分子标记检测结果可靠，但仪器、试剂都较昂贵，其利用受到一定的限制。各种遗传标记形式都有其局限性，在检测外源基因时，可根据研究条件、研究目的及研究对象，合理地选择相应的检测方法。在实际应用中，常常将几种标记结合起来使用，其结果相互印证，提高了检测结果的准确性和可靠性。

第10题：

动物转基因的方法有哪些，有何进展？

正确答案: 胚胎移植操作步骤：供受体母牛的选择，供受体同期发情，供体的超数排卵，供体的配种，胚胎采集，胚胎质量鉴定和北欧村内，胚胎的移植技术等环节。

动物转基因常用的外源基因导入方法有哪些？各有何优缺点？

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