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目的基因克隆的基本方法有哪些？

题目

目的基因克隆的基本方法有哪些？

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相似问题和答案

第1题：

PCR克隆目的基因的基本程序是什么？


正确答案:由TaqDNA聚合酶扩增的PCR产物中，其3’末端总是会带有一个非模板依赖型的突出碱基，而且这个碱基几乎总是A，因为TaqDNA聚合酶对dATP具有优先聚合活性。由于该突出碱基的存在，克隆时即可以采取TdT末端加同聚尾的方法与载体拼接，也可以使用专门的T载体克隆。

第2题：

获得动物目的基因的方法有哪些？


正确答案: ①cDNA方法；
②DNA的化学合成；
③利用PCR法获得基因，除了用到普通PCR法外，还要用到逆转录PCR、锚定PCR和反向PCR。

第3题：

克隆真核基因常用的方法有()和()。


参考答案：逆转录法;化学合成法

第4题：

什么是细胞核移植技术？克隆的基本方法有哪些？


正确答案: 核移植技术——又称细胞质工程、核质杂交，是利用显微操作技术将称为供体的一种动物细胞的细胞核移植到称为受体的同种或异种的另一种细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，形成核质杂种，并使受体细胞得以继续分裂和发育的方法。
（1）胚胎干细胞核移植；
（2）胚胎细胞核移植；
（3）胎儿成纤维细胞核移植；
（4）体细胞核移植

第5题：

请介绍3种植物目的基因的克隆方法，并说出其优缺点。


正确答案: 目前，用于植物基因克隆的常见方法有：（ps：下面随意挑三个方法就行啦）
1）图位克隆技术：建立在遗传分析和基囚足位的基础上，该技术对于基因组较大的作物，例如小麦基因的克隆难度较大；
2）转座子标签法：利用转座子插入突变使某一基因失活，进而用转座子特异基因片段做探针分离出突变的目的基因，该方法需要筛选并鉴定突变体，工作量较大：
3）差异显示技术：直接鉴定和克隆差异表达墓因，但存在假阳性率高和有些差异表达带不易扩增等问题；
4）酵母单杂交技术：在植物中应用较多的是转录因子基因的克隆，该方法针对性强，但假阳性较高；
5）cDNA文库筛选技术是一种经典的克隆基因的方法，但不易得到完整的基因全长，特别是基因的5’端。

第6题：

基因克隆过程中，获得目的基因的途径有哪些？


正确答案: （1）从基因组文库（genomic library）中获得；
（2）从cDNA文库中获得；
（3）PCR扩增特定基因；
（4）人工合成。

第7题：

链霉菌基因克隆的基本步骤有哪些？


正确答案: 链霉菌基因克隆的基本步骤：
（1）制备供体DNA片段；
（2）制备载体DNA；
（3）连接载体和供体DNA片段；
（4）将受体菌制成原生质体；
（5）将连接了供体DNA片段的载体对受体菌的原生质体进行转化；
（6）让原生质体再生细胞壁，随后对转化的细胞进行选择。

第8题：

重组DNA基本过程包括


A.目的基因的获取
B.克隆载体的构建
C.目的基因与载体的拼接
D.重组分子导入受体菌

答案：A,B,C,D
解析：

第9题：

克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？


正确答案: 表达蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白两类，具体包括如下几种结构形态：包涵体型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白

第10题：

常用的目的基因与载体的连接方法有哪些？


正确答案: 外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重组技术，主要是依赖于核酸内切限制酶和DNA连接酶的作用.一般说来在选择外源DNA同载体分子连接反应程序时，需要考虑到下列三个因素：
（1）实验步骤要尽可能地简单易行；
（2）连接形成的"接点”序列，应能被一定的核酸内切限制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段；
（3）对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰。

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