简述重组DNA技术的原理及技术。

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简述重组DNA技术的原理及技术。

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第1题：

DNA重组技术是将目的DNA在体外重组于载体DNA分子上，构建成重组DNA分子，然后将重组DNA导入宿主细胞中进行大量扩增，最终获得大量同一目的DNA片段。DNA重组技术又称（）

A、基因工程
B、蛋白质工程
C、细胞工程
D、酶工程
E、分子工程

正确答案:A

第2题：

简单说明DNA重组技术中的蓝白斑筛选原理。

正确答案: 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法：是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后，有重组质粒的细菌形成白色菌落。

第3题：

DNA克隆（也称为DNA重组技术）

正确答案:将外源DNA片段与载体分子连接，形成重组DNA分子，再将重组子导入寄主细胞内，筛选出含有外源DNA片段的转化细胞，再进行繁殖扩增，获得大量含有同样序列的DNA分子，这一过程即为DNA分子克隆。

第4题：

DNA重组是酶在生物技术上的成功应用，请简述DNA重组的步骤？

正确答案:1.目的基因的获得
方法有：基因文库（cDNA文库、基因组文库）、PCR（放达效应）、人工合成
2.目的基因与载体连接
方法有：——粘性末端——全同源性、定向克隆（两种酶切）
定向克隆可防止高背景的产生，因为全同源性会造成载体自连、重组子、目的基因自连三种可能，重组子可能还会出现正反插入的情况，使筛选过程复杂。
——平末端
酶切后也有可能产生平末端，也会出现高背景。
——人工接头——连接子（连入带粘性酶切位点的片断，再酶切）、普适子（一条链连上片断，成为粘性末端）、T-A克隆（PCR中使用的Taq聚合酶会根据模板延伸至后在链末尾加上一个A，可在克隆载体上加上T，使之连接）、同聚物加尾（末端转移酶加尾）
由于平末端连接效率比较低，可在其两端人工修饰
反应体系：目的基因、载体、T4连接酶、缓冲液
3.重组DNA导入受体（宿主）细胞——转化、转染、转导、感染
主要运用的是原核转化（导入感受态细菌，感受态：处于易于吸收外缘DNA的状态，方法：氯化钙法：DNA与其形成羟基-磷酸钙复合物，抗DNase水解）、真核转染。
4.选与鉴定
方法：
——遗传学（表形）——插入失活、蓝-白筛选、抗性基因（四环素Tet、氨苄青霉素Amp）
——酶切，在电泳（分子量、构想）
——PCR（特异性引物）
——核酸杂交（southernblot）
——免疫学方法（westernblot）
——DNA测序（sanger、焦磷酸测序）

第5题：

什么是重组DNA技术？

正确答案:重组DNA技术又称基因工程，是指利用人工手段将目标DNA与特定载体DNA连接，形成重组DNA分子，并将其转入受体细胞中。随着受体细胞的生长、分裂和分化，使目标DNA得到扩增或表达，从而改变受体细胞性状或获得目标基因表达产物的一种技术。

第6题：

简述DNA芯片技术的基本原理。

正确答案:DNA芯片技术的基本原理是许多已知序列的寡核苷酸DNA和突变DNA分别与两块DNA芯片杂交，由于至少存在有一个碱基的差异，正常和突变的DNA将会得到不同的杂交图谱，经过共聚焦显微镜分别检测二种DNA分子产生的荧光信号。

第7题：

重组DNA技术（recombination DNA technology）

正确答案:也称之基因工程（genomic engineering）。利用限制性内切酶和载体，按照预先设计的要求，将一种生物的某种目的基因和载体DNA重组后转人另一生物细胞中进行复制、转录和表达的技术。

第8题：

简述重组DNA技术上产的重组人胰岛素在临床运用上的优点。

正确答案: ①供应充分
②消除了动物胰岛组织中存在病原体而导致疾病意外传播的危险
③经济适用

第9题：

简述DNA改组技术的基本原理和操作。

正确答案:DNA改组技术又称DNA重排技术或有性PCR，指DNA分子的体外重组，是基因在分子水平上进行有性重组。通过用DNase1或者用超声波进行随机切割产生随机大小片段，再从正突变基因库中分离出来所需DNA片段，得到的片段在不加引物的多次PCR循环中，彼此之间互为模板和引物进行扩增，直到连接成为接近目的片段长度的DNA分子，然后再利用基因两端序列为引物扩增获得全长基因，这是来自不同基因之间的重组。

第10题：

外源基因与载体构成的重组DNA分子性质不同、宿主细胞不同，其重组DNA导入宿主细胞的具体方法也不同，而将外源基因与报告基因共同导入感受态宿主细胞的方法，称作（）。

A、电转化重组DNA技术
B、共转化重组DNA技术
C、体外包装转染重组DNA技术
D、脂质体导入重组DNA技术

正确答案:B

简述重组DNA技术的原理及技术。

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