简述重组人干扰素α-2b的分离工艺过程。

题目

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第1题：

重组人红细胞生成素的分离纯化工艺过程。

正确答案:①重组人红细胞生成素的分离
（1）CM－Sephrose亲和层析柱预先用Na-HAc-异丙醇活化，并用20mmol/LTrisHCl平衡缓冲液平衡。
（2）收获培养基滤膜过滤后上CM亲和层析柱，平衡缓冲液平衡。
（3）0～2mol/LNaCl，20mmol/LTris洗脱液梯度洗脱。
（4）收集活性洗脱峰10mmol/LTris透析液透析过夜。
②重组人红细胞生成素的纯化
（1）透析后的活性组分上预先平衡的DEAE离子交换柱。
（2）0～1mol/LNaCl-Tris洗脱液梯度洗脱，收集活性洗脱峰。
（3）上10%乙腈平衡的RP-HPLC柱（C4填料），10%～70%的乙腈溶液梯度洗脱，收集活性洗脱峰。
（4）上凝胶柱（预先用20mmol/L柠檬酸盐缓冲液平衡），20mmol/L柠檬酸盐缓冲液平衡并洗脱，收集活性洗脱峰（红细胞生成素）

第2题：

从原油中回收C5以上的轻质烃类，降低原油蒸气压的工艺过程是（）。

A、油气分离工艺
B、天然气净化工艺
C、原油稳定工艺
D、冷冻分离工艺

正确答案:C

第3题：

简述膜分离的工艺及各工艺的操作要点。

正确答案:膜分离工艺可划分为前处理工艺、分离工艺流程和后处理工艺三部分。前处理工艺是指被处理的料液在进入膜分离之前所采取的一系列处理措施；膜分离工艺流程可以通过对组件采取不同方式的配置来满足不同的生产需求，膜组件的配置方式有一级配置和多级配置。一级配置是指进料液经一次加压的膜分离，二级配置是指进料液经二次加压的膜分离，在同一级配置中，排列方式相同的组件组成一个段；后处理工艺包括透过液与浓缩液的后处理和膜污染后的处理：采用反渗透对某种有价值的物质进行浓缩回收时，由于膜的选择透过性，浓缩液的组成会与进料液不完全相同，这时需要对浓缩液进行组分配比的调节，而后方可使用。保护膜不受污染是维持分离过程正常进行的关键，可采用物理、化学等清洗方法。

第4题：

重组人干扰素生产工艺路线有哪几条，有何缺点？

正确答案: ①体外诱生干扰素制备工艺：仙台病毒诱导人白细胞：血浆→人白细胞（病毒诱导）→分离纯化→人白干扰素。
缺点：产量低，1g IFNα需要105L人血白细胞，来源困难，工艺复杂，收率低，价格昂贵，潜在的血源性病毒污染的可能性。
②Namalva细胞培养（病毒培养）→合成干扰素→分离纯化→多压型混合干扰素。
优点：首次实现大规模商业化生产，用细胞培养8000L。
缺点：活性低，退出临床应用。
③工程菌构建→发酵培养→包涵体→复性→重组人干扰素。
工艺特点：发酵过程，随后变性、复性过程。缺点：生物合成、纯化及制剂阶段均使用了一些动物或人血液提取成分，仍然没有摆脱潜在的传播血源性疾病的危险。
④工程ＣＨＯ细胞系构建→细胞培养→收集培养液→分离纯化→重组人干扰素。
工艺特点：分泌表达，产量低，成本高，过程控制严格。可以做到无血清培养。
⑤基因工程假单胞杆菌发酵生产工艺。
工艺特点：发酵周期短：几个小时，无需变性、复性过程，获得有活性产品，纯化过程：淘汰抗体亲和层析，制剂中采用非人血清白蛋白新型保护剂，使得整个制造过程中不使用任何血液提取成分。

第5题：

干扰素纯化工艺过程中各工段的目的是什么？

正确答案:①溶解粗干扰素：配置缓冲液（超纯水，pH7.5磷酸缓冲液，0.45μm滤器和10ku超滤系统，百级层流下收集），冷却至2-10℃。在均浆器中完全溶解粗干扰素。
②等点沉淀与疏水层析：磷酸调节至pH5.0，沉淀杂蛋白，离心收集上清液（含有人干扰素）。用NaOH调节上清液pH7.0，并用5M NaCl调节溶液电导值180ms/cm，上样，进行疏水层析，利用干扰素的疏水性进行吸附。在2-10℃下，用0.025M磷酸缓冲液（pH7.0）+1.6M NaCl进行洗涤，除去非疏水性蛋白。用0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）进行洗脱，收集洗脱液，干扰素。
或②等电点沉淀与盐析：磷酸调节pH4.5，调节电导值40 ms/cm，2-10℃静置过夜，除杂蛋白。1000ku超滤膜过滤，除去大蛋白。调整溶液pH8.0，10ku超滤膜，0.005M缓冲液。
③阴离子交换层析与浓缩：0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）平衡树脂，盐浓度线性梯度5~50ms/cm进行洗脱，2-10℃，配合SDS-PAGE收集干扰素峰。把目标馏分合并，调整溶液pH和电导值，10ku超滤膜，0.05M醋酸缓冲液（5.0）中透析。
④阳离子交换层析与浓缩：用0.1M醋酸缓冲液（pH0.5）平衡树脂。上样，相同缓冲
液冲洗。盐浓度线性梯度5-50ms/cm进行洗脱，配合SDS-PAGE收集干扰素峰。合并馏分，10ku超滤膜系统。
⑤凝胶过滤层析：0.15M NaCl的0.01M磷酸缓冲液（pH7.0）清洗系统和树脂。上样，相同洗脱液进行洗脱。合并干扰素部分。
⑥无菌过滤分装：0.22μm膜过滤干扰素溶液，分装，-20℃以下的冰箱中保存。

第6题：

装配工艺过程包括（）个过程。

A、2
B、3
C、4
D、5

正确答案:C

第7题：

简述EPA和DHA的分离纯化工艺线路。

正确答案: 二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。
碎鱼或鱼下脚料粉碎→7℃与淀粉混合→己烷提取→己烷提取液用氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠脱水→回收己烷→粗制鱼油→加1mol/LKOH乙醇溶液20℃回流6h→离心→脂肪酸钾盐皂化物→加乙醇和尿素70℃搅拌10min，饱和、低不饱和脂肪酸与尿素生成结晶→冷却过滤→50%EPA和DHA滤液→多级分子蒸馏或减压蒸馏→≥95%EPA和DHA。

第8题：

重组人干扰素发酵工段的关键控制点是什么，如何实现最优化过程控制？

正确答案: ①摇瓶培养：摇瓶培养：30℃，pH7.0，250rpm，16-20h；
②种子罐培养：接种：接入50L种子罐，接种量10%培养：30℃，pH7.0控制：级联调节通气量和搅拌转速。

第9题：

简述重组人生长激素工艺流程。

正确答案: ①基因工程大肠杆菌的培养
②基因工程大肠杆菌的发酵工艺
③重组人生长激素的分离工艺
④重组人生长激素的纯化工艺
⑤重组人生长激素制剂的质量控制。

第10题：

简述紫杉醇分离纯化工艺过程。

正确答案:由石油醚固-液萃取、碱洗、己烷沉淀、一次层析、一次结晶、溴加成、二次层析和二次结晶8道工序构成。

简述重组人干扰素α-2b的分离工艺过程。

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