简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析的原理和操作要点？

题目

参考答案和解析

正确答案:离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。
操作：a上样：上样体积不十分严格。b洗脱：增加溶液的离子强度c梯度洗脱法：改变溶液的pHd再生：用0.5mol/LNaOH和0.5mol/LNaCl混合溶液或0.5mol/LHCl处理。凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。
操作：a凝胶的选择和处理，根据相对分子质量范围选择相应型号的凝胶介质。将干胶悬浮于5-10倍的蒸馏水中，充分溶胀，抽气，装柱。b柱的选择：采用L/D比值高的柱子，可提高分辨率，但影响流速。c加样：体积不能过多，不超过凝胶床体积的5％，脱盐时可在10％左右。d洗脱：洗脱液与平衡时用的buffer一致。洗速不可过快，保持恒速。e胶的保存：洗脱完毕后，凝胶柱已恢复到上柱前的状态，不必再生处理。
亲和层析原理：利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯。

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第1题：

目前，分析氨基酸的常用的方法有自动分析法、化学分析法、酶法测定、纸层析和薄层色谱等。用于蛋白质中氨基酸组分的分析方法是A、凝胶层析

B、离子交换层析

C、亲和层析

D、圆二色性技术

E、免疫比浊法

可用于蛋白质分子量测定的是A、凝胶层析

B、离子交换层析

C、亲和层析

D、圆二色性技术

E、免疫比浊法

蛋白质经浓盐酸水解后，可测定其氨基酸顺序的方法是A、凝胶层析

B、离子交换层析

C、亲和层析

D、圆二色性技术

E、免疫比浊法

参考答案：问题 1 答案：B

问题 2 答案：C

问题 3 答案：E

第2题：

γ球蛋白粗提的最简便方法是

A、盐析法

B、有机溶剂沉淀法

C、凝胶层析法

D、离子交换层析法

E、亲和层析法

参考答案：A

第3题：

粗提免疫球蛋白的技术是A.选择性沉淀（盐析）

B.凝胶过滤层析

C.离子交换层析

D.亲和层析

E.超速离心

应用DEAE纤维素提取IgG属于A.选择性沉淀（盐析）

B.凝胶过滤层析

C.离子交换层析

D.亲和层析

E.超速离心

应用SPA-sepharose4B提取IgG属于A.选择性沉淀（盐析）

B.凝胶过滤层析

C.离子交换层析

D.亲和层析

E.超速离心

请帮忙给出每个问题的正确答案和分析，谢谢！

问题 1 答案解析：A
饱和硫酸铵盐析可用于粗提免疫球蛋白。

问题 2 答案解析：C
DEAE为离子交换树脂，提取IgG属于离子交换层析。

问题 3 答案解析：D
SPA可与IgG结合，用于提取IgG属于亲和层析。

第4题：

纯化酶和受体蛋白的最好方法是（）。

A.凝胶层析
B.离子交换层析
C.亲和层析
D.元二色性技术
E.免疫浊度法

答案：C

解析：

亲和层析是一种利用固定相的结合特性来分离分子的方法，酶和酶的底物、激素和其受体等之间的作用是高度特异的，可利用亲和层析法进行纯化。

第5题：

抗AFP-sepharose4B提取AFP的技术属于A.选择性沉淀(盐析)

B.凝胶过滤层析

C.离子交换层析

D.亲和层析

E.超速离心

粗提免疫球蛋白的技术属于A.选择性沉淀(盐析)

B.凝胶过滤层析

C.离子交换层析

D.亲和层析

E.超速离心

应用DEAE纤维素提取IgG的技术属于A.选择性沉淀(盐析)

B.凝胶过滤层析

C.离子交换层析

D.亲和层析

E.超速离心

应用SPA-sepharose4B提取IgG的技术属于A.选择性沉淀(盐析)

B.凝胶过滤层析

C.离子交换层析

D.亲和层析

E.超速离心

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问题 1 答案解析：D

问题 2 答案解析：A

问题 3 答案解析：C

问题 4 答案解析：D

第6题：

依据分子大小不同而进行的层析法是

A、吸附层析

B、分配层析

C、离子交换层析

D、凝胶过滤层析

E、亲和层析

参考答案：D

第7题：

用于纯化酶和受体蛋白的最好方法是 ( )

A、盐析法

B、亲和层析

C、凝胶层析

D、离子交换层析

E、有机溶剂沉淀法

参考答案：B

第8题：

最有效的McAb纯化方法是

A、盐析法

B、有机溶剂沉淀法

C、凝胶层析法

D、亲和层析法

E、离子交换层析法

参考答案：D

第9题：

层析技术按原理分为

A、凝胶层析

B、离子交换层析

C、高效液相层析

D、气相层析

E、亲和层析

参考答案：ABCE

第10题：

利用分子筛原理分离蛋白质的技术是

A.阴离子交换层析
B.阳离子交换层析
C.凝胶过滤
D.亲和层析
E.透析

答案：C

解析：

简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析的原理和操作要点？

题目

参考答案和解析

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