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试述PTT检测基因变异的优缺点。

题目

试述PTT检测基因变异的优缺点。

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相似问题和答案

第1题：

细菌的变异根据基因结构是否发生改变可分为

A、结构变异

B、耐药性变异

C、表型变异

D、基因型变异

E、菌落变异


参考答案：CD

第2题：

所谓的HBsAg阴性的HBV感染是由于

A:C基因发生变异
B:Pre-S1基因发生变异
C:Pre-S2基因发生变异
D:S基因发生变异
E:P基因发生变异

答案：D
解析：
本题要点为HBsAg阴性的HBV感染，S基因发生突变，导致HBsAg多肽氨基酸序列的改变的HBV病毒株感染。

第3题：

细菌的变异分为

A、形态变异、菌落变异

B、耐药性变异、毒力变异

C、基因型变异、菌落变异

D、基因型变异、表型变异

E、形态变异、结构变异


参考答案：D

第4题：

试述点突变（基因背景清楚和未知）的主要检测方法。


正确答案: 对基因背景清楚或部分清楚的点突变，可以采取直接检测基因点突变的方法，如等位基因特异性寡核苷酸杂交（allele specific oligonucleotide，ASO）、PCR-ELISA、等位基因特异性扩增（allele specific amplification，ASA）、PCR-RFLP、基因芯片技术等进行诊断，例如β地中海贫血，可以使用ASO、PCR-RFLP联合基因芯片技术进行诊断。
对于一些基因背景未知的点突变，可以采用单链构象多态性（single-strand conformationalpolymorphism，SSCP）、变性梯度凝胶电泳（denaturing graient gel electrophoresis，DEEG）、异源双链分析（heteroduplex analysis，HA）、DNA序列测定、蛋白截短测试（protein truncation test，PTT）等方法，如Hopkins大学医学院的研究人员设计了47 对PCR引物，分段扩增血友病A因子Ⅷ 基因片段，进行DGGE分析，发现多态性片段后再进行DNA序列分析，几乎查清了所有临床轻中度病人的点突变。

第5题：

试述转基因技术中外源基因的导入的常用方法及其优缺点。


正确答案: （一）显微注射法
（1）利用注射仪把外源DNA直接注入动物卵母细胞、受精卵、早期胚胎、胚胎干细胞、或体细胞的转基因方法。
（2）优点：可准确导入外源基因，转化频率高，鱼体内可达20%，不需载体，直接获得纯系，实验时间短。
（3）缺点：仪器贵重，操作繁琐耗时，一次处理卵很少。
（二）电穿孔转化法
（1）利用高压电脉冲作用，使细胞膜上产生可逆的瞬间通道，从而促进外源DNA的有效导入。电穿孔转化法的效率受电场强度、电脉冲时间和外源DNA浓度等参数的影响。
（2）优点：操作简单，同时处理大量受精卵。
（3）缺点：导入是随机的、无定向的，转移率低。
（三）精子介导法
（1）精子同外源DNA共浴后再给卵子受精，使外源DNA通过受精过程进入受精卵并整合于受体的基因组中。
（2）优点：简便，成本低，便于大量筛选，是近几年转基因动物研究的热点。
（3）缺点：处理后精子的受精能力差异较大、阳性率低、转移不稳定。
（四）基因枪转化法
（1）又称微弹轰击转化法，以高压气体为动力，利用高速运行的金属颗粒轰击细胞，将包裹在金属颗粒表面的外源DNA分子随金属颗粒送入细胞的转化方法。
（2）优点：该法简单快速，接触面积大、转化率高，可同时处理多个个体。
（3）缺点：不稳定，表达方面存在问题。
（五）病毒（噬菌体）颗粒转导法
用病毒（噬菌体）DNA（或RT-DNA）构建的克隆载体或携带目的基因的克隆体，在体外包装成病毒（噬菌体）颗粒后，感染受体细胞，使其携带的重组DNA进入受体细胞。
转基因病毒具严格的宿主特异性，且鱼类转基因病毒的分析手段非常落后，此法对鱼类暂不适应。
（六）组织注射法
将外源基因直接向机体组织注射，周围组织能将外源基因纳入，并且注入的外源基因能被整合。

第6题：

动物试验常用于检测细菌的

A:质粒
B:基因变异
C:型别
D:产毒性
E:能量代谢

答案：D
解析：
动物试验主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。

第7题：

基因工程技术引起的生物变异属于（）

  • A、染色体变异
  • B、基因突变
  • C、基因重组
  • D、不可遗传的变异

正确答案:C

第8题：

所谓的HBsAg阴性的HBV感染是由于

A．C基因发生变异

B．Pre-S1基因发生变异

C．Pre-S2基因发生变异

D．S基因发生变异

E．P基因发生变异


正确答案：D
[答案] D
[解析] 本题要点为HBsAg阴性的HBV感染，S基因发生突变，导致HBsAg多肽氨基酸序列的改变的HBV病毒株感染。

第9题：

试述外源基因表达产物的检测方法。


正确答案: （一）特异性mRNA的检测
Northern杂交，即RNA-DNA杂交分析，是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。与Southern杂交类似，检测目的RNA的存在与否及含量。
（二）报告基因的酶法检测
（1）报告基因：其表达产物及其功能在未转化的植物细胞中并不存在；其表达产物便于检测。
（2）目前动物基因工程中使用的报告基因一般是编码酶的基因，主要有：β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS基因）、氯霉素乙酰转移酶基因（CAT基因）、胸苷激酶基因（cA）、二氢叶酸还原酶基因（DHFR）等。
（三）免疫学检测
（1）免疫沉淀法
（2）酶联免疫吸附法（ELISA）
ELISA是一种利用免疫学原理检测抗原、抗体的技术。它与经典的以同位素标记为基础的液－液抗原－抗体反应体系不同之处是建立了固－液抗原－抗体反应体系，并采用酶标记。抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。酶标抗原或抗体与相应抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶遇到相应的底物时，可以催化底物的水解、氧化或还原，从而产生有色物质。颜色反应的深浅与相应抗体或抗原量相关。
（3）Western印迹法
（4）固相放射免疫（RIA）法
RIA法是一种定量测定外源表达蛋白的方法。该法具有很高的灵敏度，可检测出1pg的靶蛋白。
（四）表达产物的生物学活性检测
当外源基因的表达产物是一种酶蛋白时，可根据酶的催化反应来确定外源基因的表达与否和表达的程度。常见的有：淀粉酶、碱性磷酸酶、脂肪酶等。

第10题：

简述变性高效液相色谱法检测基因变异的优点。


正确答案: DHPLC突变检测技术与其它方法相比，具有更高的准确性和敏感性。
（1）DHPLC与各种电泳法的比较SSCP分析片段长度<300 bp，对于人类SNP的检出率为50～95％，尤其容易漏检位于发夹结构中的变异。CSGE检测杂合子的灵敏度与SSCP相当或稍低。而DHPLC对150bp~600bp的DNA片段的突变检出率都可达到100％，且而不需要特殊的样本处理。TGGE/DGGE对于异源双链及同源双链分子的检测灵敏度高出CSGE和SSCP很多。但对于较高温度的融解区域的突变检测，DHPLC的灵敏度要高于TGGE/DGGE。
（2）DHPLC与DNA测序的比较 对于频率高于20%的变异，直接测序的检出率为80％，DHPLC的检出率可达到100％；基因突变频率低于20%时就很难用测序方法检测到，而DHPLC可从待检样品中检测到占总基因量0.5-5%的突变等位基因，且重现性很好。

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