简述利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原理与方法？

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第1题：

与Sanger双脱氧末端终止法相比，Maxam-Gilbert化学裂解法最明显的优点是

A、不需要加入2＇，3＇-双脱氧核苷三磷酸底物

B、不需要DNA聚合酶的参与

C、不需要进行同位素标记

D、所测序列来自酶促反应的拷贝

E、所测序列来自原DNA分子本身

参考答案：E

第2题：

Sanger双脱氧链终止法采用DNA引物引导新生DNA的合成，采用的模板是（）

A、单链DNA
B、双链DNA
C、单链RNA
D、双链RNA
E、蛋白质

正确答案:A,B

第3题：

DNA测序技术中的链末端终止法又称为

A、经典法

B、传统法

C、酶法

D、Sanger法

E、自显影法

参考答案：CD

第4题：

双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于（）

A、DNA的聚合反应
B、DNA的连接反应
C、DNA的降解反应
D、特殊的DNA连接酶
E、聚合单体2’和5’位的脱氧

正确答案:A

第5题：

双脱氧末端终止法DNA测序不需要（）。

A、引物酶
B、DNA聚合酶
C、dNTP
D、ddNTP

正确答案:A

第6题：

提出双脱氧法测DNA一级结构的科学家是（）。

A、Maxam
B、Gilbert
C、Sanger
D、Chargaff
E、Crick

正确答案:C

第7题：

SANGER双脱氧链终止法的原理是什么？

正确答案: DNA链中核苷酸以3’，5’-磷酸二酯键连接，合成DNA所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸。2’，3’ddNTP与普通dNTP不同，它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中，但由于没有3’羟基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP，链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争，产物是一系列的核苷酸链，其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离。在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP，结果将产生4组寡核苷酸，它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置。

第8题：

Sanger双脱氧终止法对DNA测序时,下列哪种核苷酸的加入会使DNA链延长终止()

A、dGTP

B、dTTP

C、dCTP

D、Datp

参考答案：C

第9题：

简述Sanger双脱氧链终止法的基本原理。（聚丙烯酰胺凝胶电泳模式图）

正确答案: （1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5’端到3’端聚合（DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程。）；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3’-OH末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3’羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段，通过比较所以的DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。

第10题：

双脱氧核苷酸末端终止法

正确答案:在DNA合成反应体系中，除含有正常脱氧核苷三磷酸底物外，还加入少量的双脱氧核苷三磷酸（ddNTPs）特殊底物，由于这种底物的5′-磷酸基团是正常的，能够替代相对应的脱氧核苷三磷酸而与引物延伸链的3′羟基连接，进入部分新合成链；但由于这种特殊底物不存在3′羟基末端，故下一个核苷酸底物不能通过5′-磷酸基团与之形成3′，5′-磷酸二酯键，从而导致DNA新链的延伸提前终止于这一“异常”核苷酸处，而掺入的双脱氧核苷三磷酸则位于DNA延伸链的最末端。

简述利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA一级结构的原

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