试说明双脱氧法测定DNA序列的原理和方法?

题目

试说明双脱氧法测定DNA序列的原理和方法?

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相似问题和答案

第1题:

与Sanger双脱氧末端终止法相比,Maxam-Gilbert化学裂解法最明显的优点是

A、不需要加入2',3'-双脱氧核苷三磷酸底物

B、不需要DNA聚合酶的参与

C、不需要进行同位素标记

D、所测序列来自酶促反应的拷贝

E、所测序列来自原DNA分子本身


参考答案:E

第2题:

试说明非编码键盘扫描方法、原理及键值计算方法。


正确答案: 扫描原理:通常采用软件的方法,逐行逐列检查键盘状态,当发现有键按下时,用计算或查表的方式得到该键的键值。扫描方法又分为程控扫描法、中断扫描法和定时扫描法。键值计算方法:判断有无键按下,去除键抖动,判断是哪一个键按下,以求出闭合键的键值,确定键值。

第3题:

链末端终止法测定的序列是

A、DNA原分子

B、DNA的酶促反应产物

C、DNA的末端序列

D、DNA的中间序列

E、DNA的两端序列


参考答案:B

第4题:

下列哪些科学研究成果获得了诺贝尔奖?()

  • A、发现DNA双螺旋结构
  • B、双脱氧DNA序列测定方法
  • C、DNA聚合酶链式反应
  • D、蛋白质N-末端测序方法

正确答案:A,B,C

第5题:

简述链末端终止法测定DNA序列的原理。


正确答案:利用DNA聚合酶,以待测单链DNA为模板,以dNTP为底物,设立四种相互独立的测序反应体系,在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸(dideoxyribonucleoside triphosphate,ddNTP)作为链延伸终止剂,在测序引物引导下,按照碱基配对原则,每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链,通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,放射自显影检测后,从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列,由此推知待测模板链的序列。

第6题:

双脱氧核苷酸常用于DNA测序,其结构与脱氧核苷酸相似,能参与DNA的合成,且遵循碱基互补配对原则。DNA合成时,在DNA聚合酶作用下,若连接上的是一双脱氧核苷酸,子链延伸终止;若连接上的是脱氧核苷酸,子链延伸继续。在人工合成体系中,现有适量的序列为GTACATACATG的单链模版,胸腺嘧啶双脱氧核苷酸和4种脱氧核苷酸,则以该单链为模板合成出的不同长度的子链最多有( )。

A.2种
B.3种
C.4种
D.5种

答案:D
解析:
DNA合成时,在DNA聚合酶作用下,若连接上的是胸腺嘧啶双脱氧核苷酸(T’),子链延伸终止,GTACATACATG的单链模板片段中共有4个腺嘌呤脱氧核苷酸(A),胸腺嘧啶双脱氧核苷酸可能与模板上的第1、2、3、4个腺嘌呤脱氧核苷酸进行配对而使复制在相应的部位终止:也可能不与任何一个配对,DNA正常复制,所以总共能形成5种不同长度的子链。可能是CAT,CATGT,CATGTAT,CATGTAT-GT,CATGTATGTAC。

第7题:

简述化学法测定DNA序列的基本原理。


正确答案:化学法是对待测DNA进行化学降解。在化学法的测序系统中,先对待测DNA末端进行放射性标记,然后分成4组或5组互为独立的化学反应体系,每一组用不同的化学试剂特异地针对某一种或某一类碱基进行化学切割,通过化学降解后产生长短不一的DNA片段,其长度取决于改组反应所针对的碱基在待测DNA片断中的位置,将各组反应产物通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,放射自显影检测后直接识读待测DNA的序列。

第8题:

化学降解法测定的序列是

A、DNA原分子

B、DNA的酶促反应产物

C、DNA的末端序列

D、DNA的中间序列

E、DNA的降解序列


参考答案:A

第9题:

简述利用双脱氧末端终止法(Sanger法)测定DNA一级结构的原理与方法?


正确答案: 原理是采用核苷酸链终止剂—2,,3,-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH,一旦参入到DNA链中,此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则,每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时,就有两种可能性,一是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止;二是参入dNTP,使DNA链仍可继续延长,直至参入下一个ddNTP。根据这一方法,就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。
方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后,聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。

第10题:

双脱氧合成终止法测DNA序列时,加A体系中所得到的DNA片段都是以哪个核苷酸结尾()。

  • A、A
  • B、C
  • C、G
  • D、T
  • E、U

正确答案:A

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