革兰氏染色步骤包括（）

参考答案：(1)步骤：①先用结晶紫染色，菌体呈紫色;②再加碘液媒染，菌体呈紫色;③然后用乙醇脱色;革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌无色;④最后用沙黄或番红复染，革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌呈红色。(2)原理：革兰氏染色结果与细胞壁组成有关，因为革兰氏阳性细菌细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网络结构紧密，含脂量又低，当它被酒精脱色时，引起了细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小，从而阻止了不溶性结晶紫-碘复合物的逸出，故菌体呈紫色;可是革兰氏阴性细菌的细胞壁肽聚糖层较薄，含量低，而脂类含量高，当酒精脱色时，脂类物质溶解，细胞壁通透性增大，结晶紫-碘复合物也随之被抽提出来，故革兰氏阴性细菌呈复合液的红色。(3)结果：革兰氏阳性细菌呈紫色，革兰氏阴性细菌呈红色。

正确答案：步骤： 革兰氏染色：挑取可疑菌落 灭菌盐水→取菌→火焰上固定→结晶紫染色1min→水洗→革兰氏碘液染色1min→水洗→95%乙醇染色30S→水洗→沙黄复染液染色1min→水洗→待干→镜检 原理： （1）细胞壁学说：革兰氏阳性菌细胞壁薄，碱性染料容易进入细菌体内，媒染时，加固染色，脱色时不易脱掉；革兰氏阴性菌细胞壁厚，不易染上，脱色时易脱掉，复染时便为粉红色 （2）等电点学说：革兰氏阳性菌等电点低并带负电荷比革兰氏阴性菌多，遇带正电荷碱性染料结合牢固；革兰氏阴性菌带正电，遇酸性染料结合牢固； （3）酶学说：革兰氏阳性菌中含有一种核糖核酸镁盐及多糖复合物能牢固与结晶紫和碘液结合着色，相反革兰氏阴性菌中含有核糖核酸镁盐及多糖复合物少易被酒精脱色而成阴性