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蛋白质分离纯化的一般步骤是什么？

题目

蛋白质分离纯化的一般步骤是什么？

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相似问题和答案

第1题：

电泳技术一般用于蛋白质分离纯化的细分离阶段。


正确答案:正确

第2题：

分离纯化蛋白质的意义有哪些？


正确答案:
研究蛋白质的结构与功能：要求纯度高，不变性；
提取活性的酶或蛋白质：必须保持天然活性状态；
作为药物或食品添加剂：纯度要求一般。
一般步骤：材料的选择—原料的预处理—蛋白质的提取—从抽提液中沉淀蛋白质—纯化—蛋白质的结晶。超二级结构：又称模体，是指二级结构单元进一步聚集和组合在一起，形成规则的二级结构聚集体。其形成进一步降低了蛋白质分子的内能，使其更加稳定，它是蛋白质在二级结构基础上形成三级结构时经过的一个新的结构层次。

第3题：

分离纯化后蛋白质含量测定常用（ ）


正确答案：D

第4题：

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？


正确答案: 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。

第5题：

简述植物次生代谢物分离和纯化的步骤。


正确答案: 细胞破碎
次生代谢物的提取
次生代谢物的分离
浓缩与干燥

第6题：

简述蛋白质分离纯化的一般程序。


正确答案:首先根据所需蛋白质的性质选取生物体组织细胞作为材料，对所选材料进行细胞破碎、离心等前期处理，获得粗提蛋白质溶液。其次利用蛋白质溶解度的差异对蛋白质进行盐析，使其与杂蛋白分离开来，称为蛋白质的粗分离，再次根据蛋白质的分子大小及形状、电离性质、生物学功能的差异选用凝胶过滤层析、离子交换层析、电泳法、亲和层析等方法进行细分离，可得到较纯的蛋白质，此为蛋白质分离纯化的一般程序。

第7题：

（）基因工程药物的分离纯化一般不应超过5个步骤，包括（）；（）；（）；（）和（）。


正确答案:细胞破碎；固液分离；浓缩与初步纯化；高度纯化；成品加工

第8题：

主要用于蛋白质分离纯化的方法是（ ）


正确答案：A

第9题：

试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。


正确答案: 串联亲和纯化（TAP），用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用，通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤：
（1）蛋白质标记：由蛋白A的IgG结合区（ProtA）和钙调蛋白结合区（CBP）构成，中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开；
（2）构建表达标记蛋白的细胞或组织：将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位；
（3）细胞抽提物的准备；
（4）串联亲和纯化；
（5）蛋白质复合体的鉴定。

第10题：

蛋白质类物质的分离纯化往往是多步骤的，其前期处理手段多采用下列（）的方法。

  • A、分辨率高
  • B、负载量大
  • C、操作简便
  • D、价廉

正确答案:B

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