色谱方法共分几类?常用的蛋白质分离方法有哪些?并简述其原理

题目

色谱方法共分几类?常用的蛋白质分离方法有哪些?并简述其原理

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相似问题和答案

第1题:

结晶方法共分为几类?分别叙述其过程。


正确答案: 可将结晶方法分为两大类:
第一:不移除溶剂的结晶。溶液的过饱和是通过冷却而获得,也称为冷却结晶法。适用具有正溶解度特性且溶解度随温度下降而显著降低的物质结晶,如硝酸钠(钾)、硫酸镍等。所用设备称为冷却结晶器,有水冷却式、冷冻盐水冷却式结晶器等。
第二:移除部分溶剂的结晶。溶液的过饱和是通过在常压或减压下蒸发部分溶剂后浓缩而获得。这类方法通用于具有正溶解度特性且溶解度随温度下降而变化不大的物质的结晶,如硫酸铜等;也适用于负溶解度特性的物质的结晶。所用设备有蒸发式、真空式和汽化式结晶器等。

第2题:

色谱法是样品净化的主要方法,按其分离原理和操作方式可分为哪些方法?在含量测定中进行样品净化时,常用的是哪种操作方式?其主要特点是什么?   


正确答案: 色谱法按分离原理分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法。色谱法的操作方式有柱色谱、薄层色谱和纸色谱法。样品净化时最常用的是经典微柱色谱,也称固相萃取或液-固萃取法(LSE)。其主要特点是设备简单,使用方便,快速,净化效率高。

第3题:

分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有那些?它们的原理是什么?


参考答案:分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有:离子交换色谱,疏水色谱,亲和色谱和凝胶过滤色谱;
离子交换色谱,以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子和交换剂
上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法;
疏水色谱,利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差
异对蛋白质组分进行分离的色谱方法;
亲和色谱:利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附,这种结合既是特异的又是可逆的,改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质;
凝胶过滤色谱,是以多孔性凝胶填料为固定相,按分子大小对溶液中各组分进
行分离的液相色谱方法。

第4题:

请简述提高色谱分离度的方法有哪些?


正确答案: 1.选择合适的固定,改变流动相组分比例;
2.不同样品改变不同参数,如PH值、换柱子、降低进样量、降低流速、降低程序升温速率等;
3.改变洗脱剂的比例;
4.增加柱温;
5.降低塔板高度、增加相对保留时间。多是通过保留时间的调整。

第5题:

色谱法是样品净化分离的主要方法,按其分离原理和操作方式可分为哪些方法?在含量测定中进行样品净化时,常用的是哪种操作方式?其主要特点是什么?


正确答案: 色谱法按分离原理分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法。按操作方式分有柱色谱、薄层色谱和纸色谱法。样品净化时最常用的是经典微柱色谱,也称固相萃取或液-固萃取法(LSE.。其主要特点是设备简单,使用方便,快速,净化效率较高。

第6题:

蛋白质分离分析技术常用的有哪几种?简述凝胶过滤、电泳基本原理。


正确答案: 常见分离技术:离心、盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、电泳、柱层析、透析等。
凝胶过滤原理:多聚糖具有大小不一的孔径,大分子在孔径中运动距离短,洗脱快,小分子路径长,洗脱时间长。
电泳原理:凝胶中存在电场效应和分子筛效应:电荷多,运动快;分子小运动快。

第7题:

分离混合强心苷的方法可归纳为:①溶剂萃取法。②逆流分配法。③色谱法。方法①、②的原理是(),吸附色谱法多用于()强心苷的分离,逆流色谱和分配色谱法常用于()强心苷的分离,方法②常用的溶剂系统有()等。


正确答案:利用化合物在两相的分配系数差异不同进行分离;亲脂性;弱亲脂性;氯仿-甲醇-水

第8题:

简述薄层色谱法中常用的检视方法有哪些?


正确答案:荧光薄层板可采用荧光淬灭法检视;普通薄层板,有色物质可直接检视,无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度;化学方法一般用化学试剂显色后,立即覆盖同样大小的玻板,检视。

第9题:

分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有哪些?它们的原理是什么?


正确答案: 分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有:离子交换色谱,疏水色谱,亲和色谱和凝胶过滤色谱;
离子交换色谱,以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子和交换剂上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法;
疏水色谱,利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异对蛋白质组分进行分离的色谱方法;
亲和色谱:利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附,这种结合既是特异的又是可逆的,改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质;
凝胶过滤色谱,是以多孔性凝胶填料为固定相,按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方法。

第10题:

常用的浓缩方法有哪些,试简述其原理?


正确答案:浓缩的方法有:
(1)透析法:把装抽提液的透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇(PEG)或甘油中,10ml抽提液可在1h内浓缩到几乎无水的程度。
(2)沉淀法:在抽提液中加入适量的中性盐或有机溶剂使有效成分变为沉淀。
(3)吸附法:将干葡聚糖凝胶G25(或吸水棒)加入抽提液中,两者比例为1:5。由于凝胶吸水之故,抽提液的体积可缩小三倍左右,回收蛋白质量约80%。