简述革兰氏染色的过程，并说明革兰氏染色机理，其中关键步骤是哪一步。为什么？

参考答案：(1)革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁主要结构成分的差异：革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，达15~80mm。其化学成分主要是肽聚糖，站细胞壁总成分的40%~95%，形成15~50层的聚合体。此外，还有磷壁酸、多糖和蛋白质等。革兰氏阴性菌细胞壁较薄，其结构和成分较复杂，由外膜与周质间隙组成，无磷壁酸。外膜由脂多糖、磷脂、外膜蛋白质和脂蛋白等组成，脂多糖位于最外层，其中的类脂A是革兰氏阴性菌内毒素的主要成分。周质间隙是革兰氏阴性菌细胞壁外膜与细胞膜之间狭窄的空隙，其中含有一薄层肽聚糖以及蛋白酶、核酸酶、肽聚糖合成酶、结合蛋白和受体蛋白等多种周质蛋白。(2)革兰氏染色机理：1.革兰氏染色法，(1)草酸铵结晶紫染色：在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1~2min，水洗。这时细菌都染成紫色。(2)碘溶液助染：加碘溶液于抹片上，作用1~3min,水洗。这时细菌都呈更深的紫色。(3)95%酒精脱色：加95%酒精于抹片上，可见标本中一些紫色染料脱出、直至紫色染料不在脱出(时间因细菌抹片厚薄不同而异，大约30s至1min)，水洗。这时有的细菌原染上的紫色被脱去，呈无色;有的细菌原染上的紫色脱不了，仍保持紫色。(4)复染：加碱性复红液(或沙黄液或稀释石碳酸复红液)复染10~30s，水洗。这时已脱色的细菌复染成红色，未脱色的细菌呈蓝紫色。(5)油镜观察：将染好的片用滤纸盖上吸干或烘干，油镜观察，呈蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌，呈红色的为革兰氏阴性菌。2.革兰氏染色原理：G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经石炭酸复红或沙黄复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。