问答题制备固定化酶的方法有哪些？

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制备固定化酶的方法有哪些？

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第1题：

简述固定化酶、固定化细胞制备方法及特点。

正确答案: 固定化酶与固定化细胞都是以酶的应用为目的，所以两者的制备法基本相同，均包括下面的四种方法：
包埋法、吸附法、共价偶联、非共价结合法
一、
包埋法的优点：反应条件温和，很少改变酶结构但是又较牢固的固定化方法。
包埋法的缺点：只有小分子底物和产物可以通过高聚物网架扩散，对那些底物和产物是大分子的酶并不适合。
二、
吸附法的优点：操作简单，可供选择的载体类型多，吸附过程可同时达到纯化和固化的目的，固定化酶使用失活后可以重新活化和再生。
吸附法的缺点：酶和载体的结合力不强，易脱落，会导致催化活力的丧失和沾污反应产物。
三、
共价偶联法的优点：得到的固定化酶结合牢固，稳定性好，利于连续使用。
共价偶联法的缺点：载体活化的操作复杂，反应条件激烈，同时共价结合会影响到酶的空间构象，从而对酶的催化活性产生影响。
四、
非共价结合法的优点：载体是酶蛋白本身，结合力强，能提高非常高的酶浓度
非共价结合法的优点：难制备，不能再生，固定化费用高。

第2题：

共价结合制备固定化酶的方法有哪些？

正确答案:重氮化、迭氮化、酸酐活化法、异硫氰酸酯法、双功能试剂臣应、澳化氰活化法、硫交换法、醛胺缩合法、四元缩合法、金属整合法、醚氯反应、异氰酸反应、烷基化反应及硅烷化反应等。

第3题：

简述酶和细胞的固定化方法有哪些？各有哪些特点？

正确答案:（1）载体结合法：是将酶结合于不溶性载体上的一种固定化方法。可分为物理吸附法，离子结合法，共价结合法。
物理吸附法：优点在于操作简单，可选用不同的吸附剂，酶失活后载体仍可再生。缺点在于最适吸附酶量无规律可循，酶与载体之间的吸附剂不强，酶易于脱落。
离子结合法：操作简单，处理条件温和，酶的活性中心不易被破坏。但是酶和载体的结合力比较弱，会发生酶脱落的现象。
共价结合法：酶和载体的结合力牢固，不会发生酶脱落。但反应条件苛刻，操作复杂，酶的活性中心会遭到部分破坏。
（2）交联法：优点是交联后的酶活性较高，缺点是反应条件剧烈，酶的回收率低。
（3）包埋法：不需要改变酶的高级结构，酶的回收率较高。但包埋酶会导致酶的失活，包埋法只适合作用于小分子底物和产物的酶，对于那些作用于大分子底物和产物的酶是不合适的。

第4题：

用带负电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH比游离酶的最适pH（），用带正电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH比游离酶的最适pH（），用不带电荷的载体制备的固定化酶，其最适pH与游离酶的最适pH（）。

正确答案:高；低；相同

第5题：

酶的固定化方法有哪些？各自的优缺点是什么？

正确答案:方法有：吸附法、共价结合法、交联法。
吸附法优点：操作简便，条件温和，吸附剂可反复使用。
缺点：酶和载体吸附力较弱，易解吸脱落；
共价结合法优点：酶与载体结合牢固，不会轻易脱落，可连续使用。
缺点：反应条件较激烈，易影响酶的空间构象而影响酶的催化活性。
交联法优点：操作简便，结合牢固，可长时间使用。
缺点：交联反应条件较激烈，酶分子的多个基团被交联，致使酶活力损失较大，且制成的固定化酶颗粒较小，机械强度也较低。

第6题：

戊二醛与酶反应制备固定化酶属于固定化酶方法中的（）。

A、吸附法
B、交联法
C、包埋法
D、液膜法

正确答案:B

第7题：

酶的固定化方法有哪些？

正确答案: A.吸附法
（1）物理吸附法；
（2）离子吸附法；
B.化学结合法
（1）共价结合法；
（2）共价交联法；
C.包埋法
（1）凝胶网格型；
（2）微囊型。

第8题：

固定化酶的常用方法有哪些？

正确答案: 固定化酶的常用方法有：
㈠载体结合法是将酶结合到不溶性载体上的一种固定方法，根据结合形式的不同可以分为物理吸附法、离子结合法和共价结合法；
㈡交联法是用双功能或多功能试剂使酶与酶或微生物的细胞与细胞之间交联的固定化方法；
㈢包埋法可分为网格型和微囊型。

第9题：

固定化酶制备的基本原则？

正确答案: （1）维持原有酶催化活性及专一性
（2）有利于酶催化反应的主动化和连续化
（3）有最小位阻空间
（4）酶和载体结合牢固，使与酶的反复使用不妨碍酶与底物接触
（5）稳定性高
（6）成本低

第10题：

为什么要固定化酶？酶固定化的优缺点有哪些？

正确答案:酶的固定化是指将酶与不溶性载体结合，使游离酶、细胞或细胞器等的催化活动完全或基本上限制在一定空间内的过程，经过固定化的酶，容易与溶液中的底物和产物分离，且可使酶反复使用，效率高，生产成本大大下降，并增强了其稳定性。因此，固定化酶在工业生产上的应用为生产自动化、管道化、连续化提供了条件，促进了酶工程的飞跃发展。
固定化酶优点：
（1）同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次、长期地使用；并可预测衰变的速度；
（2）固定化后，和反应物分开，有利于控制生产过程，同时纯化简单；
（3）稳定性显著提高，包括热稳定性、对蛋白质的稳定性（提高了对蛋白质酶、蛋白质变性剂和抑制剂的抵抗作用）、操作稳定性和储藏稳定性；（4种稳定性）
（4）便于控制其形状以适应不同用途，如颗粒、线条、薄膜和酶管等；
（5）提高了产物质量，应用范围广；
（6）提供了研究酶动力学的良好模型。
缺点：
（1）一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都是通过一系列的酶促反应才能得到的。
（2）固定化酶一般只适用于水溶性的小分子底物；大分子底物常受载体阻拦，不易接触酶，致使催化活力难以发挥。
（3）首次使用时投入成本较高。

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