酶和酶菌体的固定化方法有几种?各用什么载体?

题目
问答题
酶和酶菌体的固定化方法有几种?各用什么载体?
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相似问题和答案

第1题:

入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点,替换型载体有2个成对的限制性酶切点。


正确答案:正确

第2题:

酶的固定化方法有哪些?各自的优缺点是什么?


正确答案:方法有:吸附法、共价结合法、交联法。
吸附法优点:操作简便,条件温和,吸附剂可反复使用。
缺点:酶和载体吸附力较弱,易解吸脱落;
共价结合法优点:酶与载体结合牢固,不会轻易脱落,可连续使用。
缺点:反应条件较激烈,易影响酶的空间构象而影响酶的催化活性。
交联法优点:操作简便,结合牢固,可长时间使用。
缺点:交联反应条件较激烈,酶分子的多个基团被交联,致使酶活力损失较大,且制成的固定化酶颗粒较小,机械强度也较低。

第3题:

酶和细胞固定化最常用有效的方法是什么?


参考答案:包埋法、化学结合法和物理吸附法。

第4题:

为什么要固定化酶?酶固定化的优缺点有哪些?


正确答案:酶的固定化是指将酶与不溶性载体结合,使游离酶、细胞或细胞器等的催化活动完全或基本上限制在一定空间内的过程,经过固定化的酶,容易与溶液中的底物和产物分离,且可使酶反复使用,效率高,生产成本大大下降,并增强了其稳定性。因此,固定化酶在工业生产上的应用为生产自动化、管道化、连续化提供了条件,促进了酶工程的飞跃发展。
固定化酶优点:
(1)同一批固定化酶能在工艺流程中重复多次、长期地使用;并可预测衰变的速度;
(2)固定化后,和反应物分开,有利于控制生产过程,同时纯化简单;
(3)稳定性显著提高,包括热稳定性、对蛋白质的稳定性(提高了对蛋白质酶、蛋白质变性剂和抑制剂的抵抗作用)、操作稳定性和储藏稳定性;(4种稳定性)
(4)便于控制其形状以适应不同用途,如颗粒、线条、薄膜和酶管等;
(5)提高了产物质量,应用范围广;
(6)提供了研究酶动力学的良好模型。
缺点:
(1)一种酶只能催化一种化学反应,而在生产实践中,很多产物的形成都是通过一系列的酶促反应才能得到的。
(2)固定化酶一般只适用于水溶性的小分子底物;大分子底物常受载体阻拦,不易接触酶,致使催化活力难以发挥。
(3)首次使用时投入成本较高。

第5题:

固定化酶是固定在载体上并在一定的空间范围内进行的()酶。


正确答案:催化反应

第6题:

载体结合法是酶和细胞固定化的主要方法之一,下列哪种方法不属于载体结合固定化方法()。

  • A、物理吸附法
  • B、离子结合法
  • C、共价结合法
  • D、交联法

正确答案:D

第7题:

在什么情况下最好使用粒载酶或γ噬菌体载体或cosmid载体?


正确答案: γ噬菌体载体适用于建立cDNA基因文库;cosmid载体适用于克隆大片段的外源DNA片段,所以被广泛地用于构建基因文库。

第8题:

酶和细胞的固定化载体主要有()、()和()三类。


参考答案:吸附载体;包埋载体;交联载体

第9题:

用带负电荷的载体制备的固定化酶,其最适pH比游离酶的最适pH(),用带正电荷的载体制备的固定化酶,其最适pH比游离酶的最适pH(),用不带电荷的载体制备的固定化酶,其最适pH与游离酶的最适pH()。


正确答案:高;低;相同

第10题:

简述酶固定化技术的几种主要方法,并比较其优缺点。


正确答案:(1)吸附法:通过载体表面和酶分子表面之间的氢键、疏水键和π-电子亲和力等物理作用力,将酶固定于不溶性载体的方法。
(2)结合法:选择适宜的载体,使之通过共价键或离子键,与酶结合在一起的固定化方法,称为结合法。根据酶与载体结合的化学键不同,结合法分为离子键结合法和共价键结合法。
(3)交联法:利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间,酶分子与惰性蛋白间,或酶分子与载体间进行交联反应,以共价键制备固定化酶的方法。
(4)包埋法:将聚合物的单体和酶溶液混合后,借助聚合促进剂(包括交联剂)的作用使单体进行聚合,从而将酶包埋于聚合物中的固定化方法。吸附法的优点是酶的活性中心不易被破坏,且酶的高级结构变化少,酶活力损失很少。缺点是酶与载体相互作用力弱、酶容易从载体上脱落下来。
离子结合法的优点是操作简单,处理条件温和,酶的高级结构和活性中心的氨基酸残基不易被破坏,能得到酶活回收率高的固定化酶。缺点是载体和酶的结合力比较弱,容易受缓冲液种类或pH的影响,在离子强度高的条件下进行反应时,酶往往会从载体上脱落。
共价结合法的优点是酶与载体结合牢固,稳定性好,一般不会因底物浓度高或存在盐类等原因而轻易脱落,这有利于连续使用。缺点是反应条件苛刻,操作复杂,而且由于采用了比较激烈的反应条件,可能会引起酶蛋白高级结构的变化,破坏部分活性中心,因此往往不能得到比活力高的固定化酶,其酶活回收率一般为30%左右,有时甚至底物的专一性等酶的性质也会因固定化而发生变化。
交联法的优点是操作简便。缺点是交联反应的过程往往比较激烈,许多酶易在固定化过程中失效,酶回收率不高。
包埋法优点是一般不会与酶蛋白的氨基酸残基进行结合反应,很少改变酶的高级结构,故而一般比较安全,酶活回收率较高。缺点是聚合过程中由于自由基的产生、放热以及酶和试剂间可能发生化学反应等,也往往会导致酶的失活。而且只适合作用于小分子底物和产物的酶。
包埋、共价结合、交联三种虽结合力强,但不能再生、回收;物理吸附法制备简单,成本低,能回收再生,但结合差,在受到离子强度、pH变化影响后,酶会从载体上游离下来;包埋法各方面较好,但不适于大分子底物和产物。