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什么叫PCR技术？有几个操作步骤？

题目
问答题
什么叫PCR技术？有几个操作步骤？
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相似问题和答案

第1题：

什么叫PCR的引物？什么叫特异性引物？什么叫简并性引物？


正确答案: 引物：所谓引物，实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段，两引物间距离决定扩增片段的长度，两引物的5’端决定扩增产物的5’末端位置。（引物要大大过量）
特异性引物：引物是与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段，是决定PCR特异性的关键。只有当每条引物都能特异性地与模板DNA中的靶序列复性形成稳定的结构，才能保证其特异性。
简并性引物：简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少简并性。

第2题：

什么是PCR，有什么特点，扩增反应有哪几个步骤？


正确答案: PCR即聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)，具有特异、敏感、快速等特点。扩增反应包括3个步骤，变性、退火（复性）、延伸3个步骤。

第3题：

什么叫PCR的反应平台？形成的原因可能是什么？


正确答案: PCR反应不是无穷的进行，到了PCR后期，当产物达0.3～1pmol/L时，由于产物的堆积，使原来以指数增长的速率变成平坦的曲线。
形成原因：由于引物和dNTP的减少，Taq酶失活；或由于底物过剩、非特异性产物的竞争、变性时解链不完全、退火时产物单链自己缔合、最终产物的阻化作用。

第4题：

什么是PCR，请试述PCR技术的原理，以及PCR的反应过程？


正确答案:P.CR就是聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）。
原理：双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
反应过程：首先。双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子；然后，加入到反映混合物中的引物和模板DNA的特定末端相结合；戒指，DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用反应混合物中的三种核苷三磷酸，在引物的3’-OH端合成新生的DNA互补链。

第5题：

什么是DMA？DMA操作可以分几个主要步骤？


正确答案: （1）DMA方式：即直接内存访问方式，完全由硬件执行I/O交换的工作方式。在这种方式下，DMA控制器从CPU完全接管对总线的控制，数据交换不经过CPU，而直接在内存与设备之间进行。
（2）DMA操作可以分3个主要步骤：
即传送前预处理、正式传送、传送后处理阶段。
①预处理阶段：由CPU执行几条输入输出指令，测试设备状态。向DMA控制器的设备地址寄存器中送入设备号，并启动设备。向内存地址计数器中送入起始地址。向字计数器中送入交换的数据字个数。
②正式传送阶段：外设准备好发送数据（输入）或接收数据（输出）时，发出DMA请求，由DMA控制器向CPU发出总线使用权的请求（HOLD）。CPU在本机器周期执行完毕后响应该请求并使CPU的总线驱动器处于高阻状态，然后与系统总线相脱离，DMA控制器接管数据总线和地址总线的控制，并向内存提供地址。在内存和外围设备之间进行数据交换。每交换一个字则地址计数器和字计数器加1，当记数值到0时，DMA操作结束并向CPU提出中断报告。
③DMA后处理工作：一旦DMA的中断请求得到响应，CPU将停止主程序的执行，转去执行中断服务程序进行DMA操作的后处理。包括校验送入内存的数据是否正确；决定使用DMA方式传送数据还是结束传送；测试传送过程中是否发生错误。

第6题：

什么是PCR技术？PCR的基本原理是什么？


正确答案:PCR即聚合酶链式反应，是一种在体外快速扩增特定目的基因或DNA序列的技术，故又称基因的体外扩增技术。它可以在试管中建立反应，经过数小时之后，就能将极微量的目的基因或DNA片断扩增数十万乃至千百万倍，无需经过繁琐费时的基因克隆程序，便可获得足够数到两精确的DNA拷贝。
PCR的基本工作原理：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5’末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。

第7题：

渗透探伤操作有哪几个基本步骤？


正确答案: 渗透探伤操作的基本步骤有：
预清洗——渗透——去除——显像——观察检查——后清洗。

第8题：

PCR反应一般分为几个步骤？各步骤有什么特点？


正确答案: A.变性：双链DNA变成单链DNA。变性温度的高低由G+C含量决定；变性时间由DNA链长度决定。常规PCR变性条件为94～95度45s。
B.退火，将温度下降至适宜温度，使引物与模板DNA退火结合；退火是使引物和模板DNA复性。复性过程采取的温度（Ta）至关重要。复性温度过高，引物不能与模板很好地复性，扩增效率很低；复性温度太低，引物将产生非特异性复性，导致非特异性的DNA片段的扩增。退火温度通常在比理论计算的引物和模板的熔解温度低3～5℃的条件下进行。
C.延伸：寡核苷酸引物的延长，一般在耐热DNA聚合酶的最适温度下进行。对于Taq酶，为72～78度。
D 循环数：PCR扩增所需的循环数取决于反应体系中起始的模板拷贝数以及引物延伸和扩增的效率。
一般扩展条件：94℃60s 37℃60s 72℃120s，共25-30个循环。

第9题：

什么叫PCR？


正确答案:聚合酶链反应是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。
它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。

第10题：

什么叫PCR？它的基本原理和反应过程有哪些？


正确答案:PCR也叫聚合酶链式反应，是DNA片段体外扩增的一种技术。在微量离心管中,加入适量的缓冲液, 微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶, 一对合成DNA的引物,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,一般样品是经过30次循环,最终使基因放大了数百万倍; 扩增了特异区段的DNA带。

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