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原生质体纯化的两种方法是什么？

题目
问答题
原生质体纯化的两种方法是什么？
参考答案和解析
正确答案： 上浮法：是将酶解的原生质体与蔗糖溶液（23％左右）混合。
下沉法：是先将原生质体与13％的甘露醇混合，（1分）然后加到23％的蔗糖溶液顶部，形成一个界面。
两种方法中，均在1000g下离心5-10分钟，会在蔗糖溶液顶部形成一条原生质体带。用吸管将带轻轻地吸出来，用培养基悬浮离心，然后稀释到104-l05个／ml，用于培养。
解析： 暂无解析
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相似问题和答案

第1题：

酶法分离原生质体中的两种关键酶是什么？


正确答案: 果胶酶和纤维素酶。

第2题：

原生质体培养有哪些常用方法？用哪些方法可以实现原生质体融合？


正确答案:培养方法可以分为固体培养法和液体培养法两大类，后来又由此派生出一些不同形式的原生质体培养方法。常用的有液体浅层培养法、固体平板法、悬滴培养法等。
原生质体融合有自发融合、诱导融合。其中诱导融合的方法有：硝酸钠法、多聚化合物法、高pH高Ca++法、聚乙二醇法、还有电融合等方法。

第3题：

原生质体的分离有( )和( )两种方法。


参考答案:机械法，酶解法

第4题：

原生质体融合方法及原理是什么？


正确答案: 化学法诱导融合：在无菌条件下按比例混合双亲原生质体→滴加PEG溶液，摇匀，静置→滴加高钙高pH溶液，摇匀，静置→滴加原生质体培养液洗涤数次→离心获得原生质体细胞团→筛选、再生杂合细胞。
物理法诱导融合：将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后，插入微电极，接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲，则使原生质体质膜被击穿而发生融合。

第5题：

简述原生质体的分离方法。


正确答案: （1）机械分离法：先对材料进行质壁分离处理，然后切割。
（2）酶法分离：
一步法：将果胶酶和纤维素酶等混合处理材料，直接分离获得原生质体。
二步法：先用果胶酶处理材料，降解细胞间层使细胞分离，再用纤维素酶水解胞壁释放原生质体。

第6题：

原生质体制备方法


正确答案: ①G+菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶。
②G-菌原生质体获得：EDTA鳌合剂处理，溶菌酶。
③放线菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶。霉菌原生质体获得：纤维素酶。酵母菌原生质体获得：蜗牛消化酶。

第7题：

如何纯化分离的植物原生质体并鉴定其活力？


正确答案: （1）原生质体的纯化
①沉降法：应用原生质体的比重大于溶液的性质而使原生质体沉于底部。
②漂浮法：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮于液体表面。
③梯度离心法：选两种不同渗透浓度的溶液，其中一种溶液密度大于原生质体的密度，另一种溶液小于原生质体的密度。
（2 原生质体活力的测定
①形态识别：形态上完整，呈圆形，含有饱满的细胞质，颜色鲜艳的即为存活的原生质体。
②染色识别
1、0.1%酚番红或Evans蓝染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。
2、双醋酸盐荧光素（FDA）染色法：在荧光显微镜下有荧光的即为有活性的原生质体。

第8题：

促进原生质体融合常见的两种方式是PEG诱导和________。


参考答案：电融合

第9题：

原生质体杂种细胞的筛选方法。


正确答案: 杂种细胞的筛选方法有：
①细胞系互补的选择方法，包括叶绿素缺失互补、营养缺陷互补和抗性互补等；
②利用物理特异性差异的选择方法：这是利用两个原生质体物理特异性差异的一种选择，包括原生质体的大小、颜色、浮密度等的不同来选择；
③利用生长特异性差异的选择方法。

第10题：

机械法分离原生质体的主要缺点是原生质体的产量很低、方法繁琐费力。


正确答案:正确

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