如何确证混合斑？

参考答案：

通常混合斑是指精液和阴道分泌液混合形成的斑迹。
从广义上说，混合斑是指精液与任何体液，如阴道分泌液、血液、唾液、尿液、汗液等混合形成的斑迹。

参考答案：

（1）最简单的方法是显微镜检查。如斑痕中含有精子和阴道脱落上皮细胞，则可确证为混合斑。若未见精子或阴道脱落上皮细胞，则可用精斑的确证方法斑迹中的精液成分。
（2）差异裂解法

参考答案：形态学检验;免疫学检验;生物化学检验

本题答案：1)确定是否为混合斑——多个>2个峰的图谱//norH1>60%H2，stutter<15%mainH
2)确定等位基因峰——accordingtoladder
3)确定构成混合物的组分数——n个等位基因数提示至少有n/2(Z)个组分
4)统计分析：似然率法
5)结巴带
6)等位基因丢失
7)LCN影响
8)Amelogenin基因的X和Y峰面积——判断是否为混合斑&混合斑中男女成分比例
9)Y-STR基因座等位基因数——推断混合斑的最少组分数目

参考答案：

1.形态学检验
2.免疫学检验
3.生物化学检验

参考答案：

1.确证混合斑
2.混合斑中精液的个人识别

参考答案：对比推断法。用常规方法测定混合斑中的血型及被害人血液或唾液的血型，然后，进行对比分析，推断出精液的血型。这种方法具有一定的局限性，如果被害人的血型是AB分泌型，则无法推断出强奸人的血型。
分离混合斑的成分，然后分别进行血型检验。例如，用抗人精浆特异性蛋白血清（AsPP）结合混合斑中的精液蛋白，洗除未被结合的阴道分泌物蛋白后，在对精液蛋白作血型测定。

参考答案：

（1）精子检出法
（2）抗人精血清沉淀试验
（3）P30蛋白检出法

正确答案：论述精(液)斑与其他体液、分泌物混合斑的个人识别鉴定。在强奸案中，精液、阴道分泌液、尿和血液可相混形成混合斑。轮奸案中，可能几个人的精液与阴道分泌液形成混合斑。因此，混合斑的个人识别是很困难的。混合斑检验，首先是用显微镜观察、生物化学等方法确定混合斑的组成，然后进行血型、DNA等检验。目前混合斑中精(液)斑血型检验，一般是先测定混合斑的血型以及被害人血液或唾液的血型，进行比对分析，若混合斑的血型与被害人不同，可推断为精(液)斑的血型;若相同，需要分离混合斑成份，分别测定其血型。可采用洗涤法、高速离心法和微孔滤膜过滤法等提取混合斑中的精子，涂片后。以解离试验或红细胞粘附试验检测精子血型;用电泳法分离精液与阴道分泌液，再用吸收试验分别测定其血型。也可将混合斑检材用生理盐水反复离心洗涤后，取沉渣涂片，作红细胞粘附试验、酶标抗体或用荧光抗体作免疫组化检测精子及阴道脱落上皮细胞的ABO血型。还可检测精液特有的血型DIAGGT等确定精(液)斑的血型。此外，提取混合斑中DNA(精子与阴道上皮脱落细胞的细胞核)，检测DNA指纹，进行个人识别。用单位点探针检测“DNA指纹图谱”与被害人及犯罪嫌疑人的“DNA指纹图”比较，可确定混合斑为何人所留。但混合斑中无精子时，不能进行DNA分析。

母核和结构的呈色反应、沉淀反应、制备衍生物测定熔点、水解产物的反应、薄层色谱法、紫外分光光度法、红外分光光度法等都是鉴别甾体激素药物常用的方法。

一、呈色反应 

(一)与强酸的呈色反应 

硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，硫酸为主。可能机制为浓硫酸与甾体的酮基质子化反应，形成正碳离子，然后与HSO4-作用。 

特点：操作简便，反应灵敏，通过形成的颜色或荧光的不同而互相区别，但操作条件不易掌握。

(二)官能团的呈色反应 

1.C17-α-醇酮基 有还原性，能与氧化剂四氮唑盐反应显色。（可做薄层的显色剂）；   2.酮基 C3-、C20-能与2，4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼等羰基试剂反应呈色。   3.甲酮基以及活泼亚甲基 能与亚硝铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛类反应呈色。   4.有机氟 经氧瓶燃烧后生成无机氟化物，在与茜素蓝及硝酸亚铈呈色；   5.酚羟基 能与重氮磺酸反应生成红色偶氮染料。

二、沉淀反应 

1.与斐林试剂 C17-α-醇酮基具有还原性，生成橙红色氧化亚铜沉淀。   2.氨基硝酸银 C17-α-醇酮基，黑色金属银沉淀   3.硝酸银 炔雌醇、炔诺酮，白色沉淀。     4.硝酸-硝酸银 有机氯破坏在酸性条件下，白色沉淀。

三、制备衍生物测定其熔点 

生成酯、肟、缩氨基脲，或利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，然后测定其熔点。   1.酯的生成   2.酮肟的生成   3.缩氨基脲的生成   4.酯的水解 

四、水解产物的反应 

醋酸、戊酸和己酸酯水解后鉴别酸。

五、紫外分光光度法 

C=C-C=O和C=C-C=C共轭系统，可用规定波长和吸收度比值法鉴别。

六、红外分光光度法

结构复杂，各国药典几乎均采用红外分光光度法鉴别，中国药典95版。36种原料，其中33种采用该法。

七、薄层色谱法 

简便、快速、分离效能高等特点。

方法： 供试品溶液和对照品溶液的制备 供试品通常需做前处理（如有机溶剂提取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。将处理好的供试品和对照品用规定溶剂配成一定浓度的溶液备用。   展开与检出 将供试品与对照品在同一块薄层板上分别点样，用规定的展开剂展开，取出晾干，用规定的显色剂显色，立即检视。供试品溶液所显斑点与对照品溶液所显斑点的Rf值相同。

八、高效液相色谱法

保留时间一致鉴别。