问答题简述蛋白质组表达模式研究的主要技术及其中样品分离技术的原理。

题目

问答题

简述蛋白质组表达模式研究的主要技术及其中样品分离技术的原理。

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相似问题和答案

第1题：

蛋白质组定量技术面临的难点主要包括（）。

A、极酸极碱性蛋白难分离
B、极大极小的蛋白难分离
C、蛋白质表达的瞬时变化
D、蛋白质表达量差异很小
E、低丰度蛋白质检测困难

正确答案:C,D,E

第2题：

简述蛋白质组表达模式研究的主要技术及其中样品分离技术的原理。

正确答案: 蛋白质组表达模式的主要技术有双向凝胶电泳、以质谱为代表的蛋白质鉴定技术及生物信息学技术。双向凝胶电泳包括等电聚焦电泳（IEF）和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。质谱技术主要有电喷雾质谱（ESI-MS）和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）。
原理：根据蛋白质等电点的不同进行第一向等电聚焦电泳分离；然后转移到二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶上，再根据相对分子量大小不同进行分离。

第3题：

蛋白质分离分析技术常用的有哪几种？简述凝胶过滤、电泳基本原理。

正确答案: 常见分离技术：离心、盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、电泳、柱层析、透析等。
凝胶过滤原理：多聚糖具有大小不一的孔径，大分子在孔径中运动距离短，洗脱快，小分子路径长，洗脱时间长。
电泳原理：凝胶中存在电场效应和分子筛效应：电荷多，运动快；分子小运动快。

第4题：

简述吸附色谱分离技术的原理。

正确答案:利用溶质与吸附剂之间的分子吸附力（范德华力，包括色散力、诱导力、定向力以及氢键）的差异而实现分离

第5题：

是目前蛋白质组研究中最有效的分离技术（）

A、二维凝胶电泳
B、图像分析技术
C、质谱技术
D、蛋白质芯片技术
E、噬菌体展示

正确答案:A

第6题：

简述反义寡核苷酸技术原理及其调节基因表达的主要机理。

正确答案: 反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASON）技术根据碱基互补结合原理，人工或生物合成与目的DNA或RNA互补的寡核苷酸，将其导入细胞，通过其与胞内目的DAN或RNA特异结合，抑制甚至阻断目的基因转录和/或翻译，达到人工调控基因表达的目的。
A.SON主要通过以下几种机理调节基因表达：
（1）形成三螺旋DNA（triplex DNA）或D环（D-loop）结构；
（2）与细胞内目的mRNA互补结合，形成DNA-RNA异源杂交体，激活核糖核酸酶H（RNase H）特异性降解mRNA；
（3）与核内不均一RNA（hnRNA）互补结合，破坏正常剪接形成mRNA的过程；
（4）与核糖体rRNA的mRNA结合位点互补结合，阻止mRNA的结合和翻译启动；
（5）ASON与mRNA互补结合，破坏其进入正确翻译部位的途径。

第7题：

什么是蛋白质组学？简述二维电泳（2-DE）和质谱（MS）技术在蛋白质组学研究中的应用。

正确答案: 蛋白质组学（Proteomics）：指在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质表达水平，翻译后修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识。
目前蛋白质组学研究在表达蛋白质组学方面研究的最为广泛，其分析通常有三个步骤：第一步、运用2-DE技术分离样品中的蛋白质；第二步、应用质谱技术或N末端测序鉴定2-DE分离的蛋白质；第三步、应用生物信息学技术存储、处理、比较获得的数据。
（1）2-DE（Two-dimensional gel electrophoresis，双相凝胶电泳）
2-DE在1975年出现，是一项广泛应用于分离细胞、组织、或其他生物样品中蛋白质混合物的技术。它根据蛋白质不同的特点分两相分离蛋白质。第一相是等电聚焦（IEF.电泳，根据蛋白质等电点的不同进行分离。
第二相是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE.，根据蛋白质的分子量不同进行分离。经过2-DE以后，二维平面上每一个点一般代表了一种蛋白，这样成千种不同的蛋白即可被分离，有关蛋白质的等电点、分子量及每种蛋白的数量信息也可以得到。
（2）MS（MassSpectrometry，质谱）
对2-DE所产生的上千个蛋白用传统的方法如Edman降解法等进行分析将是一个很艰巨的任务。质谱技术的发展解决了这一难题。它需要三个步骤，首先通过离子化装置将分子转化为气态离子，接着通过质谱分析器按照质荷比（m/z）的不同进行分离，最后转化到离子检测装置。

第8题：

目前在蛋白质组学的研究中主要采用了哪些技术？

正确答案: ①蛋白质的分离技术：二维凝胶电泳。
②蛋白质的鉴定技术主要包括：质谱技术、Edman降解分析技术、蛋白质分子结构分析技术。
③蛋白质与核酸间相互作用的研究技术：凝胶滞后实验、DNase Ⅰ 足纹分析、核酸一蛋白质杂交实验。
④蛋白质与蛋白质间相互作用的研究技术：酵母双杂交技术。

第9题：

简述蛋白质组研究的技术体系及路线。

正确答案: （1）蛋白质分离技术.
①样品制备：包括蛋白质的溶解、变性及还原。
②第一向为pH等电聚焦电泳。
③第二向为SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）。
④蛋白质的检测：常利用荧光检测蛋白质。
⑤蛋白质图谱数字化分析。
（2）蛋白质组分析技术.
（3）常采用蛋白质谱技术分析蛋白质组。
（4）蛋白质组数据库的建立和生物信息学。

第10题：

简述生物分离纯化技术的原理和特点

正确答案: 基本原理：利用混合物中不同组分间物理、化学和生物学性质的差别来实现组分间的分离或纯化。
技术原理：选用能够识别这些差别的分离介质或扩大这些差别的分离设备来实现组分间的高效分离。
特点：
⑴环境复杂、分离纯化困难含量低、工艺复杂；
⑵稳定性差、操纵要求严格；
⑶目标产物最终的质量要求很高；
⑷终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同 ⑸ 终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同。

简述蛋白质组表达模式研究的主要技术及其中样品分离技术的原理。

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