简述PCR及其临床应用。

题目
问答题
简述PCR及其临床应用。
参考答案和解析
正确答案: 聚合酶链反应(PCR):利用DNA聚合酶(如TagDNA聚合酶)等在体外条件下,催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物:单链DNA片段。过程:变性DNA双链-单链(93~98℃),退火引物与模板结合(37~65℃),延伸双链合成(70~75℃)。常见PCR技术的类型:原位PCR、逆转录PCR(RT-PCR)及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用:(1)在感染性疾病中的应用:对传染性疾病进行病原学确证诊断;对病原体进行基因分型和同源性比较;克隆病原体各种蛋白质的基因,用于蛋白表达,制备诊断试剂或疫苗;发现新病原体;克隆病原体各种基因,建立基因表达载体,用于基因治疗。(2)遗传性疾病的基因诊断:发现的遗传病有4000多种;产前诊断PCR-RFLP;PCR-ASO。(3)肿瘤的研究及诊断:癌基因与抑癌基因。(4)在法医学中的应用:个人认识;亲子鉴定。(5)其他应用:DNA克隆;引入点突变、缺失或插入;重组PCR;DNA测序;示差PCR。
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第1题:

简述咽的层次及其临床应用。


正确答案:咽壁自内向外分为粘膜、纤维膜层、肌层和外膜4层:
(1)。粘膜。
(2)。纤维膜。
(3)肌层:咽肌由3对斜行的咽缩肌及3对纵行的咽提肌组成。
(4)外膜:为咽筋膜,系颊筋膜的延续。
在咽后壁与椎前筋膜间即为咽后间隙。咽后壁组织瓣手术即在椎前筋膜之前进行,咽后瓣组织包括粘膜、咽纤维膜和咽上缩肌在内。因咽的主要血管神经皆循咽侧壁走行,故咽后壁组织瓣手术时不易伤及。

第2题:

简述PCR原理及其基本反应步骤。


正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板互补的DNA链。

第3题:

简述RT-PCR技术的概念及其原理。


参考答案:RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。

第4题:

简述HLA分型方法的种类及其临床应用。


正确答案:分型方法:
①血清学分型法(方法名称,检测对象);
②细胞学分型法(名称及检测对象);
③分子生物学分型方法(名称、特点)。
临床应用:
①器官移植时组织配型;
②监测排斥反应;
③发现新的HLA型别或等位基因,研究HLA的多态性;
④研究HLA与某些疾病发生的关系等。

第5题:

简述PCR基因扩增仪的实际应用。


正确答案:PCR基因扩增仪广泛应用于医学领域,主要包括:感染性疾病的分子诊断和研究;遗传性疾病的分子诊断和研究;恶性肿瘤的分子诊断和研究; PCR扩增仪在移植配型上的应用;PCR扩增仪在法医学上的应用;PCR扩增仪在分子生物学中其他领域的应用。

第6题:

简述PCR技术在免疫学中的应用。


正确答案:1.HLA分型监测HLA系统的特定等位基因与某些疾病的发生方面,PCR技术极大地提高了HLA分型的特异性和敏感性。
2.用固定PCR(A-PCR)进行T细胞受体、免疫球蛋白及补体的研究。
3.病原体的检测病毒特别是逆转录病素均取得了较好的结果。
4.用于自身免疫性疾病基因谱的研究
5.淋巴因子定量。

第7题:

简述磁共振成像(MRI)及其临床应用价值。


正确答案: MRI是利用原子核在磁场内所产生的信号经计算机重建图像的新一代成像技术,可使某些CT扫描不能显示的病变成像显影,当前MRI的临床应用日益广泛,其主要用途如下。
(1)颅内疾病特别是鞍区、后颅窝和脊髓病变的显像明显优于CT。
(2)直接显示心脏大血管内腔,观察其形态学变化,可在无创伤条件下进行。
(3)骨关节和肌肉系统疾病的显像比CT清楚。
(4)对纵隔、腹部和盆腔疾病有一定的诊断价值,但对肺部和胃肠道疾病的诊断作用有限。
(5)增强MRI能进一步提高其敏感性.造影剂可采用GdBDTPA。

第8题:

PCR检测技术有何临床应用。


正确答案:(1)PCR在病原微生物的检测中的应用;(2)PCR在遗传病中的应用;(3)PCR在肿瘤中的应用;(4)其它方面的应用:PCR技术除用于临床诊断和治疗外,还可用于DNA指纹、个体识别、亲子关系识别、法医物证等。

第9题:

简述PCR的原理及其应用。


正确答案:PCR技术是模拟体内条件下,应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。它根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的核苷酸引物,这一单链引物的序列决定了待扩增片段的特异性和片段长度,当有模板DNA存在时,引物便可在一定的复性温度下特异地与热变性形成单链的DNA模板互补形成“退火”。当有DNA聚合酶和dNTP存在时,便可在一定条件下,按5(→3(方向从引物端合成DNA链,从而可以产生倍增的DNA片段,当经过30~35个周期后便可产生100万倍以上的所需DNA片段。由于PCR扩增技术的快速、简便、准确、可靠,因此,该技术已广泛应用于遗传病的基因诊断,病原体的检测,肿瘤的DNA诊断,法医学亲权鉴定,性别鉴定以及在DNA水平上研究生物进化等。

第10题:

简述PCR及其临床应用。


正确答案:聚合酶链反应(PCR):利用DNA聚合酶(如TagDNA聚合酶)等在体外条件下,催化一对引物间的特异DNA片段合成的基因体外扩增技术。引物:单链DNA片段。过程:变性DNA双链-单链(93~98℃),退火引物与模板结合(37~65℃),延伸双链合成(70~75℃)。常见PCR技术的类型:原位PCR、逆转录PCR(RT-PCR)及定量RT-PCR、反向PCR、PCR-SSCP、PCR-ELISA.固相锚定PCR、mRNA差异显示逆转录PCR。PCR的应用:(1)在感染性疾病中的应用:对传染性疾病进行病原学确证诊断;对病原体进行基因分型和同源性比较;克隆病原体各种蛋白质的基因,用于蛋白表达,制备诊断试剂或疫苗;发现新病原体;克隆病原体各种基因,建立基因表达载体,用于基因治疗。(2)遗传性疾病的基因诊断:发现的遗传病有4000多种;产前诊断PCR-RFLP;PCR-ASO。(3)肿瘤的研究及诊断:癌基因与抑癌基因。(4)在法医学中的应用:个人认识;亲子鉴定。(5)其他应用:DNA克隆;引入点突变、缺失或插入;重组PCR;DNA测序;示差PCR。