简述质粒DNA纯化方法。

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简述质粒DNA纯化方法。

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第1题：

下列对细菌质粒生物学特性叙述正确的是

A:质粒DNA复制为自主复制
B:质粒DNA复制为非自主复制
C:质粒是细菌生命活动不可缺少的物质
D:细菌内结构相似的质粒都能稳定共存
E:质粒DNA不能复制

答案：A

解析：

第2题：

用柱层析法纯化质粒DNA时DNA的何种残基与硅基质结合（）

A、嘌呤
B、磷酸盐残基
C、嘧啶
D、糖基
E、氢离子

正确答案:B

第3题：

脉冲电场凝胶电泳主要用于

A、细菌基因分型

B、测序前的产物纯化

C、超螺旋大质粒的分离

D、SNP位点的检测

E、小片段DNA的梯度分析

参考答案：AC

第4题：

简述质粒DNA的分离提取方法。

正确答案: （1）选择性抽提法，（2）碱性SDS法

第5题：

寡聚dT-纤维素柱层析用于（）

A、从总DNA中分离纯化质粒DNA
B、从总核蛋白中分离DNP
C、除去杂蛋白
D、从总RNA中纯化mRNA

正确答案:D

第6题：

试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。

正确答案: 质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。
碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。
煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，Triton X-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。
S.DS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。

第7题：

从细菌中分离质粒DNA的方法都包括的基本步骤是（）。

A、培养细菌检测质粒
B、培养细菌使质粒扩增
C、收集和裂解细胞
D、分离和纯化质粒DNA
E、B+C+D

正确答案:E

第8题：

简述质粒的DNA特性。

答案：

解析：

(1)质粒的复制:质粒DNA在细菌中的复制有两种,一种是严紧型质粒的复制,它们的复制与细菌的繁殖密切相关;另一种是松弛型质粒复制,能在没有蛋白质合成的情况下继续复制。(3分)(2)质粒的不相容性:是指细菌质粒不能在相同细胞中同时存在的现象。(3分)(3)质粒的转移性:在自然条件下,许多质粒都可通过细菌结合的作用,将质粒复制子转移到新的宿主菌内。(2分)(4)质粒中的选择性标记:常用的选择性标记是抗生素抗性基因。(2分)

第9题：

碱裂解法制备质粒DNA的方法有哪些？

正确答案: （1）接种菌落于含抗生素的LB中，37℃剧烈振荡反应；
（2）培养液4℃12000rpm30min离心；
（3）重悬细菌于100μl冰预冷的溶液I（50mM葡萄糖25mMTris-HCL（pH8.0），10mMEDTAPh8.0）中剧烈振荡；（4）加200μl亲配制液溶液II（0.2MNaOH1%SDS），混合内容物，不要振荡，置冰上；
（5）加150μl冰预冷溶液III（5MKac60ml，冰乙酸11.5ml，水28.5ml），温和振荡10s置于阔步3-5min；
（6）40℃。12000rpm离心5min，转移上清；
（7）上清加等量酚；氯仿抽提，4℃，12000rpm离心2min，收集上清；
（8）加入2倍体积乙醇，振荡混合，室温放置2min；
（9）4℃，12000rpm，离心5min，弃上清；
（10）倒置离心管，倾干液体；
（11）1ml70%乙醇4℃洗涤沉淀，弃上清，空气中干燥10min；
（12）用500μl含无DNA酶的胰RNA酶（20μg/ml）的TE重新溶解核酸，振荡，贮于-20℃。

第10题：

小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？

正确答案: 最可能的原因：从细菌沉淀或从核酸沉淀中吸上清时注意不够，带了杂蛋白。其最根本的原因是因为细菌的细胞壁成分或核内某些蛋白质可能抑制限制酶活性。克服方法：用酚氯仿对溶液抽提；用离心柱层析法纯化DNA。

简述质粒DNA纯化方法。

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