试述转基因技术中外源基因的导入的常用方法及其优缺点。

题目

试述转基因技术中外源基因的导入的常用方法及其优缺点。

参考答案和解析
正确答案: (一)显微注射法
(1)利用注射仪把外源DNA直接注入动物卵母细胞、受精卵、早期胚胎、胚胎干细胞、或体细胞的转基因方法。
(2)优点:可准确导入外源基因,转化频率高,鱼体内可达20%,不需载体,直接获得纯系,实验时间短。
(3)缺点:仪器贵重,操作繁琐耗时,一次处理卵很少。
(二)电穿孔转化法
(1)利用高压电脉冲作用,使细胞膜上产生可逆的瞬间通道,从而促进外源DNA的有效导入。电穿孔转化法的效率受电场强度、电脉冲时间和外源DNA浓度等参数的影响。
(2)优点:操作简单,同时处理大量受精卵。
(3)缺点:导入是随机的、无定向的,转移率低。
(三)精子介导法
(1)精子同外源DNA共浴后再给卵子受精,使外源DNA通过受精过程进入受精卵并整合于受体的基因组中。
(2)优点:简便,成本低,便于大量筛选,是近几年转基因动物研究的热点。
(3)缺点:处理后精子的受精能力差异较大、阳性率低、转移不稳定。
(四)基因枪转化法
(1)又称微弹轰击转化法,以高压气体为动力,利用高速运行的金属颗粒轰击细胞,将包裹在金属颗粒表面的外源DNA分子随金属颗粒送入细胞的转化方法。
(2)优点:该法简单快速,接触面积大、转化率高,可同时处理多个个体。
(3)缺点:不稳定,表达方面存在问题。
(五)病毒(噬菌体)颗粒转导法
用病毒(噬菌体)DNA(或RT-DNA)构建的克隆载体或携带目的基因的克隆体,在体外包装成病毒(噬菌体)颗粒后,感染受体细胞,使其携带的重组DNA进入受体细胞。
转基因病毒具严格的宿主特异性,且鱼类转基因病毒的分析手段非常落后,此法对鱼类暂不适应。
(六)组织注射法
将外源基因直接向机体组织注射,周围组织能将外源基因纳入,并且注入的外源基因能被整合。
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第1题:

试述转基因技术中外源基因的导入的常用方法及其优缺点。


正确答案: (一)显微注射法
(1)利用注射仪把外源DNA直接注入动物卵母细胞、受精卵、早期胚胎、胚胎干细胞、或体细胞的转基因方法。
(2)优点:可准确导入外源基因,转化频率高,鱼体内可达20%,不需载体,直接获得纯系,实验时间短。
(3)缺点:仪器贵重,操作繁琐耗时,一次处理卵很少。
(二)电穿孔转化法
(1)利用高压电脉冲作用,使细胞膜上产生可逆的瞬间通道,从而促进外源DNA的有效导入。电穿孔转化法的效率受电场强度、电脉冲时间和外源DNA浓度等参数的影响。
(2)优点:操作简单,同时处理大量受精卵。
(3)缺点:导入是随机的、无定向的,转移率低。
(三)精子介导法
(1)精子同外源DNA共浴后再给卵子受精,使外源DNA通过受精过程进入受精卵并整合于受体的基因组中。
(2)优点:简便,成本低,便于大量筛选,是近几年转基因动物研究的热点。
(3)缺点:处理后精子的受精能力差异较大、阳性率低、转移不稳定。
(四)基因枪转化法
(1)又称微弹轰击转化法,以高压气体为动力,利用高速运行的金属颗粒轰击细胞,将包裹在金属颗粒表面的外源DNA分子随金属颗粒送入细胞的转化方法。
(2)优点:该法简单快速,接触面积大、转化率高,可同时处理多个个体。
(3)缺点:不稳定,表达方面存在问题。
(五)病毒(噬菌体)颗粒转导法
用病毒(噬菌体)DNA(或RT-DNA)构建的克隆载体或携带目的基因的克隆体,在体外包装成病毒(噬菌体)颗粒后,感染受体细胞,使其携带的重组DNA进入受体细胞。
转基因病毒具严格的宿主特异性,且鱼类转基因病毒的分析手段非常落后,此法对鱼类暂不适应。
(六)组织注射法
将外源基因直接向机体组织注射,周围组织能将外源基因纳入,并且注入的外源基因能被整合。

第2题:

转基因技术中外源基因的整合效率受到外源DNA拷贝数(剂量)、片断长度(构型)、注射方式等因素的影响,而与受体鱼种类无关。


正确答案:错误

第3题:

(4)研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器,需将目的基因导入牛受精卵,最常用的导入方法是_________;获得转基因母牛后,如果_________即说明目的基因已经表达。


正确答案:

显微注射法;

牛奶中含有人类白细胞介素(或:牛乳腺细胞已合成人类白细胞介素)

第4题:

常用的外源基因导入受体细胞的方法有()()()


正确答案:化学法;电击法;显微注射法

第5题:

转基因是将()导入受体细胞的过程。

  • A、外源蛋白
  • B、细菌
  • C、外源氨基酸
  • D、外源基因

正确答案:D

第6题:

转基因技术中外源基因整合的检测适宜的方法有()。

  • A、特异性mRNA的检测
  • B、采用Southern技术,以外源DNA作为探针,进行杂交检测
  • C、酶联免疫吸附法(ELISA)
  • D、Northern杂交

正确答案:B

第7题:

转基因技术中外源基因表达产物检测不适宜的方法有()。

  • A、特异性mRNA的检测
  • B、报告基因的酶法检测
  • C、酶联免疫吸附法(ELISA)
  • D、Southern印迹法

正确答案:D

第8题:

试述传统育种技术与转基因技术的异同。


正确答案: 都是通过获得优良基因对目标动、植物进行遗传改良。但在基因转移的范围和效率上有差别:
(1)传统育种技术是在生物个体水平上进行,操作的对象是整个基因组,所转移的是大量的基因,不可能准确地对某个基因进行操作和选择,对后代的预见性差,选出优良性状的概率差。所需时间长,要经过数代不断选种和繁育,数年或几十年才能育成一个优良的品种。转基因技术所操作和转移的一般是明确的基因,功能清楚,目的基因被转移到受本后其表现可预测,并在短期内表现出人类所期望的遗传性状。
(2)传统育种技术是只能在种内个体间实现基因转移,血缘关系较远的生物间通过传统的杂交进行基因转移的难度非常大。转基因技术所转移的基因不受生物体间亲缘关系的限制,可有效地避免种间、属间甚至动植物间物种杂交的不亲和,打破了自然繁殖中的种间隔离。通过对动、植物基因组的定向改造,使基因能在种系关系较远的机体间流动,大大提高了动、植物品种改良的效率。

第9题:

试述转基因技术应用价值和可能造成的危害。


正确答案:(1)具有明显的经济效益
(2)解决发展中国家人民的饥饿问题
(3)可能大大缩短作物生长期危害:农作物广泛减产;严重影响整个食物供给;未进行较长时间的安全性试验;产生毒素;产生不能预见的和未知的变态反应原;减少食品的营养价值或降解食品中重要的成份;产生抗菌素耐药性细菌;副作用能杀害人体

第10题:

转基因植物中外源基因的存在问题:外源基因在后代中的遗传多样性和外源基因在后代中表达的()。


正确答案:不确定性