简述几种测定蛋白质分子量的方法及原理。

题目

简述几种测定蛋白质分子量的方法及原理。

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相似问题和答案

第1题:

简述蛋白质的测定的原理?


正确答案:原理:蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质的含量。测定步骤:消化→ 蒸馏→滴定。

第2题:

什么是沉淀法,简述沉淀蛋白质的几种主要方法的原理及应用。


正确答案:沉淀法:利用某种试剂使生物大分子沉淀,但不影响大分子结构的方法。
主要方法:
(1)中性盐沉淀(盐析法):中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性,所以在加入大量中性盐后,其夺走了水分子,破坏了水膜。同时又中和了电荷,破坏亲水胶体,蛋白质分子即形成沉淀。
应用:除了蛋白质和酶以外,多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。盐析法应用最广的还是在蛋白质领域。
(2)有机溶剂沉淀法:降低了水溶液的介电常数,减小了溶剂的极性。同时削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的相互作用,从而导致蛋白质溶解度降低而沉淀。除此以外,使带电溶质分子更易互相吸引而凝集,破坏了蛋白质的水化膜,从而发生沉淀。
应用:生化制备。
(3)选择性变性沉淀法:利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子与非目的生物大分子在物理化学性质等方面的差异,选择一定的条件使杂蛋白等非目的物质变性沉淀而得到提纯,称为选择性变性沉淀法。
应用:通常用于生物大分子分离纯化的初期,是分离纯化流程中附带进行的一个分离纯化步骤。
(4)等电点沉淀法:等电点沉淀法是利用具有不同等电点的两性电解质在达到电中性时溶解度最低,易发生沉淀,从而实现分离的方法。
应用:此法主要用于在分离纯化流程中去除杂蛋白,而不用于沉淀目的物。
(5)有机聚合物沉淀

第3题:

简述直接电位法的原理及测定离子活度的方法。


正确答案:在试液中待测物质浓度不变的情况下,通过测量对待测离子的活度(浓度)有响应的指示电极的电位,进行定量分析。用直接电位法测定离子活度的方法主要有:标准曲线法和标准加入法。

第4题:

陶瓷坯体有哪几种干燥方法及设备?简述其原理?


正确答案: 1自然对流干燥2强制对流干燥3、辐射式干燥

第5题:

聚合物分子量分布的测定方法有几种?简述GPC测定原理。


正确答案:有端基分析法、气相渗透法、渗透压法、光散射法、粘度法凝胶渗透色谱法(GPC.。聚合物的凝胶渗透色谱法(GPC.是一种柱子分级分离法,在柱中溶解的聚合物分子按其大小被分离.当溶质分子在一个流动液体中通过多孔粒子固定床时,将被分级分离.一定大小的溶质分子被柱形填料上的细孔所截留,这些填料本身有填料的小孔,较大的溶质分子透过细孔的比例较小,从而它比小的分子更容易以柱上洗提出.聚合物的凝胶渗透色谱法能给出分子大小的分布,根据此分布并利用公式就能够计算出平均分子量.凝胶透色谱法不是一种基本的方法,这种方法需要标定,以便把原始实验数据统计和转换成分子量分布.因此,它是一种好的分析手段。

第6题:

亲和层析用于蛋白质分子量的测定是较好的方法。


正确答案:错误

第7题:

常用的测定蛋白质分子量的方法有()、()和()等。


正确答案:沉降速度法;凝胶过滤法;电泳法

第8题:

酚试剂法测定蛋白质浓度的特点是

A、较适合含单一蛋白质标本的测定

B、较适合几种蛋白质混合标本的测定

C、由于灵敏度低,适于蛋白质含量较高标本的测定

D、方法原理是酚试剂与蛋白质中的肽键显色

E、方法原理是蛋白质中的酪氨酸、色氨酸残基对280nm有紫外吸收峰


参考答案:A

第9题:

简述几种常用灭菌方法的基本原理及适用范围。


正确答案: 几种常用灭菌方法的基本原理及适用范围:
⑴化学物质灭菌:化学物质与微生物细胞中的某种成分产生化学反应,如使蛋白质变性、酶类失活、破坏细胞膜透性而杀灭微生物。只适合于局部空间或某些器械的消毒。
⑵辐射灭菌:辐射灭菌是利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀灭微生物。紫外线波长在2400-3000A范围内(其中最有效波长是2537A)对微生物有高度致死效应,主要是与菌体核酸的光化学反应而造成菌体死亡。紫外线对营养细胞和芽孢均有杀灭作用,但穿透力很低,只适用于表面灭菌,过氧化物能阻碍微生物的代谢活动而导致菌体迅速死亡。X射线的致死效应与环境中还原性物质和含硫氢化合物的存在密切相关。X射线的穿透力极强,因不经济,同时其辐射是自一点向四面八方放射,不适于大生产使用。
⑶干热灭菌:干热灭菌的是指在干燥高温条件下,微生物细胞内的各种与温度有关的氧化反应速度迅速增加,使微生物的致死率迅速增高的过程。主要用于需要保持干燥的器械、容器的灭菌。
⑷湿热灭菌:湿热灭菌是直接用蒸汽灭菌。蒸汽冷凝时释放大量潜热,并具有强大的穿透力,在高温和水存在时,微生物细胞中的蛋白质易发生不可逆的凝固性变性,致使微生物在短时间内死亡。由于湿热灭菌有经济和快速等特点,因此被广泛用于工业生产。

第10题:

结合SDSPAGE电泳的分离原理说明未知蛋白质分子量的测定方法。


正确答案: 1.SDS-PAGE的原理:SDS是一种阴离子去污剂,作为变性剂和助溶性试剂,能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白质分子的二级、三级结构;而强还原剂,如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。因此,在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后,蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链,解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后,形成带负电的蛋白质-SDS胶束,所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量,消除了不同分子间的电荷差异;同时,蛋白质-SDS聚合体的形状也基本相同,这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响。
2.未知蛋白质分子量的测定:基于上述SDS-PAGE的原理介绍,我们可以利用SDS-PAGE电泳进行未知蛋白质的分子量测定;以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGE电泳得到不同标准蛋白的电泳迁移率,制作标准校正曲线,然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGE电泳,测定迁移率,从标准曲线得到相应的分子量;