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请举例说明构建噬菌体cDNA文库的主要操作。

题目

请举例说明构建噬菌体cDNA文库的主要操作。

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相似问题和答案

第1题：

构建cDNA文库时，首先需分离细胞的

A．染色体DNA

B．线粒体DNA

C．mRNA

D．cDNA


正确答案：C
解析：基因文库可分为基因组DNA文库和cDNA文库。①基因组DNA文库是指包含某一生物细胞全部基因组DNA序列的克隆群体，它以DNA片段的形式贮存着某一生物的全部基因组DNA信息。基因组DNA文库的构建是将纯化的细胞基因组DNA(染色体DNA)用适当的限制性内切酶消化，获得一定大小的DNA片段，将这些片段克隆到噬菌体载体中，从而获得一群含有不同DNA片段的噬菌体。②cDNA文库是包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mRNA经反转录而合成的cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段形式贮存着该组织细胞的基因表达信息。cDNA文库的构建是将组织细胞的mRNA经过反转录合成cDNA，后者被克隆进入质粒或噬菌体载体，转化宿主细胞后获得的克隆群体。

第2题：

构建一个理想的cDNA文库需要考虑的因素有哪些？


正确答案: A.cDNA文库的质量
（1）文库的代表性：是指文库中包含的重组cDNA分子是否能完整地反映出来源细胞中表达的全部信息（即mRNA种类），是体现文库质量的最重要指标。
（2）重组cDNA片段的序列完整性：5’端非翻译区，中间的编码序列和3’端非翻译区，文库中重组cDNA片段尽可能完整的反应出天然基因的结构，cDNA是否完整，对文库使用价值的影响并不是绝对的 完整性这一指标要根据研究目的及筛选方法来灵活考虑，使细胞中表达出的mRNA在构建的cDNA文库中尽可能含有相应其各部分序列的重叠cDNA片段是其中一种折中的做法。
B.文库筛选可选择的具体方法，决定文库筛选方法的主要因素是
1.构建文库的克隆载体系统；
2.相应的宿主细胞系统。
最理想的情况是对于具体构建出的一个cDNA文库，应能够使用多种筛选方法，有效地分离鉴定出目的基因，从而使研究者能够在已有研究条件上，在文库筛选的具体方法上有灵活的选择余地。

第3题：

以下关于cDNA文库和基因组文库的关系说法正确的是()

A、cDNA文库比基因组文库大

B、cDNA文库比基因组文库小

C、cDNA文库和基因组文库一样大

D、二者大小随机，不能比较


参考答案：B

第4题：

设计试验，构建小鼠发情期卵巢组织的cDNA文库。


正确答案:（一）从小鼠发情期卵巢组织中提取总RNA，（常用异硫氰酸胍苯酚法，可以使破碎细胞和灭活RNA酶同步进行）得到的总RNA流经oligo（dT）纤维素柱时，在高盐缓冲液作用下（目的是稳定核酸双链），mRNA被特异地吸附在柱上，逐渐降低盐浓度，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA被洗下，经过两次oligo纤维素柱，就可以得到较纯的mRNA。
（二）cDNA第一链的合成利用反转录酶的催化作用，以mRNA为模板，oligo（dT）为引物，合成与mRNA互补的cDNA链。
（三）cDNA第二链的合成cDNA第一链合成完成后，得到了DNA-RNA杂交分子，用碱变性法，去除杂交分子中的RNA。进一步用DNA聚合酶I和反转录酶合成第二条链。
（四）cDNA与接头连接机与载体连接
（五）质粒的转化或噬菌体的包装及转染
（六）cDNA文库的扩增
（七）cDNA文库的筛选与鉴定

第5题：

简述cDNA的扣除文库的构建。


正确答案: 将两种不同组织来源的mRNA进行比较，用扣除杂交排除相同部分，即共同表达的那部分mRNA，选出有差异的、特异表达的mRNA，构建成的cDNA文库。
构建过程：从两种不同类型的细胞T、D分别提取mRNA，T细胞mRNA逆转录合成单链的cDNA，向T细胞cDNA中过量加入D细胞总mRNA。
两者有共同序列的mRNA和cDNA形成mRNA-cDNA杂合分子，余下单链cDNA代表了仅仅存在于T细胞表达的基因信息。

第6题：

关于cDNA文库的叙述，哪些是正确的


A.仅代表构建文库取材细胞当时表达的成套基因
B.同一种细胞在发育的不同阶段构建的文库，它们包含的基因不尽相同
C.正常肝细胞与肝癌细胞构建的cDNA文库,两者包含的基因不尽相同
D. cDNA文库中不包含内含子序列及基因的调控序列

答案：A,B,C,D
解析：

第7题：

重组DNA技术中，目的基因的获取方法不包括（）

  • A、通过PCR合成
  • B、化学直接合成
  • C、构建cDNA文库
  • D、构建基因组文库
  • E、从基因组DNA中直接提取

正确答案:E

第8题：

构建cDNA文库时，首先需分离细胞的

A．

B．

C．

D．


正确答案：C
解析：基因文库可分为基因组DNA文库和cDNA文库。①基因组DNA文库是指包含某一生物细胞全部基因组DNA序列的克隆群体，它以DNA片段的形式贮存着某一生物的全部基因组DNA信息。基因组DNA文库的构建是将纯化的细胞基因组DNA(染色体DNA)用适当的限制性内切酶消化，获得一定大小的DNA片段，将这些片段克隆到噬菌体载体中，从而获得一群含有不同DNA片段的噬菌体。②cDNA文库是包含某一组织细胞在一定条件下所表达的全部mRNA经反转录而合成的cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段形式贮存着该组织细胞的基因表达信息。cDNA文库的构建是将组织细胞的mRNA经过反转录合成cDNA，后者被克隆进入质粒或噬菌体载体，转化宿主细胞后获得的克隆群体。

第9题：

简述构建cDNA文库的基本操作？


正确答案:（1）细胞总RNA的提取和mRNA分离
（2）第一链cDNA和第二链cDNA合成并连接产生重组DNA
（3）将重组DNA通过载体转入适当的宿主
（4）筛选鉴别重组克隆
（5）扩增和保存文库

第10题：

M13噬菌体适用于（）。

  • A、构建基因组文库
  • B、构建cDNA文库
  • C、克隆较大的DNA片段
  • D、克隆单链外源DNA片段进行序列分析
  • E、以上都对

正确答案:D

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