为了提高基因工程菌的质粒稳定性，可采用哪些主要方法？

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第1题：

为了提高基因工程菌的质粒稳定性,可采用那些主要方法?

参考答案：为了提高基因工程菌的质粒稳定性，可采取：
(1)选择合适的宿主菌;
(2)选择合适的载体;
(3)选择压力;
(4)分阶段控制培养;
(5)控制培养条件;
(6)固定化技术。

第2题：

什么是基因工程菌，工程菌构建的基本过程和各阶段的主要任务是什么，所涉及基因工程原理是什么？

正确答案: 将目的基因导入细菌体内使其表达，产生所需要的蛋白的细菌称为基因工程菌。
工程菌构建的基本过程如下：目标基因克隆（PCR、文库筛选、化学合成）→表达载体构建（酶切、链接）→遗传转化与筛选（外源基因导入与培养）→工程菌（获得新形状、功能、产生物质）
酶切：在特异位点上催化双链DNA分子的断裂，产生相应的限制性片段。（DNA+缓冲液+限制性内切酶；37℃，1小时；加热、加EDTA终止；电泳检查酶切完整性）
链接：DNA双链上相邻的3’羟基和5’磷酸基团共价结合形成3’-5’磷酸二酯键，使原来断开的DNA缺口重新连接起来。（载体片段和基因片段，缓冲液，连接酶；16-26℃，数小时；70℃加热10min终止反应）
转化：把外源基因导入宿主细胞的过程。（氯化钙法向大肠杆菌导入外源基因）

第3题：

为了减轻工程菌代谢负荷,提高外源基因表达水平可采取什么措施?

参考答案：将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段。

第4题：

为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有（）

A、将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段。
B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达。
C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的复制。
D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制

正确答案:A,C

第5题：

简述质粒不稳定的原因及提高稳定性的方法.

正确答案: 其主要与两个因素有关：
一是含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率；
二是这两种菌的比生长速率差异的大小。提高质粒稳定性的方法：工程菌的培养一般采用分成两阶段培养法来提高质粒的稳定性。在培养的第一阶段以增加菌体的生长达到一定密度为目的，外源基因不表达，从而使工程菌与质粒丢失菌的比生长速率的差异减小，增加了质粒的稳定性；第二阶段再诱导外源基因的表达。可以在培养基中加入选择性压力如抗生素等，以抑制质粒丢失菌的生长。控制适当的培养条件也能使工程菌具有优势的比生长速率，可调控的培养条件有温度、PH、培养基组分和溶解氧等。

第6题：

基因工程菌的构建包括（）、（）、（）三个主要环节。

正确答案:目标基因的获得；最佳表达载体的构建；工程菌构建

第7题：

基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定性的现象，质粒不稳定分为（）和（）；基因工程菌的不稳定性至少维持（）代以上。

正确答案:分裂不稳定性；结构不稳定性；25

第8题：

基因工程菌的培养方式主要有();();();()和();

参考答案：分批培养;补料分批培养;连续培养;透析培养;固定化培养

第9题：

影响基因工程菌培养工艺的主要因素有哪些？

正确答案:主要因素有：
（1）培养基的影响；
（2）接种量的影响；
（3）温度的影响；
（4）溶解氧的影响；
（5）诱导时机的影响；
（6）诱导表达程序的影响；
（7）PH的影响。

第10题：

基因工程菌的稳定性至少要维持在（）以上。

A、20
B、25
C、30
D、40

正确答案:B

为了提高基因工程菌的质粒稳定性，可采用哪些主要方法？

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