第9题:
问答题
简述MTT试验原理、试验步骤及应用。
正确答案:
试验原理:活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色甲攒颗粒(formazan),并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值
试验步骤:
(1)单细胞悬液接种于96孔培养板;103-104细胞/孔,每孔培养基总量200微升(96孔培养板每孔容积370微升),37℃、5%CO2培养箱中培养一段时间
(2)加入2毫克/毫升的MTT液(50微升/孔);继续培养3小时。
(3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150微升/孔),将培养板置于微孔板振荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。
(4)酶标仪检测各孔OD(570nm),记录结果。
(5)绘制曲线:以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制生长曲线。
应用:MTT法简单快速、准确,广泛应用于新药筛选、细胞毒性试验、肿瘤放射敏感性实验等
解析:
暂无解析