什么是PCR扩增法，其原理、操作步骤、反应过程和意义？

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第1题：

温度均一性较好的PCR仪为

A、水浴锅PCR基因扩增仪和压缩机PCR基因扩增仪

B、半导体PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪

C、压缩机PCR基因扩增仪和半导体PCR基因扩增仪

D、压缩机PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪

E、水浴锅PCR基因扩增仪和离心式空气加热PCR基因扩增仪

参考答案：E

第2题：

进行PCR扩增DNA时反应体系应加入什么物质?

参考答案：模板DNA、耐高温的DNA聚合酶、引物、PCR缓冲液、脱氧核苷酸贮备液。

第3题：

原位PCR和普通PCR在操作过程中的不同点是

A、需要扩增DNA

B、需要扩增RNA

C、需要扩增蛋白

D、需要或不需要提取核酸

E、需要严防各类污染

参考答案：D

第4题：

简述PCR原理及其基本反应步骤。

正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA链。

第5题：

PCR反应过程分为三个步骤，即（），（）和（）。

正确答案:变性；退火；延伸

第6题：

定量PCR与定性PCR测定原理的最主要区别点在于前者的测定点在PCR的指数扩增期,而后者多为扩增平台期。()

此题为判断题(对，错)。

答案：正确

第7题：

简述PCR扩增包括3个步骤。

正确答案:A.DNA变性：通过加热使靶DNA双链解离成两条单链。
B.引物与靶DNA退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至靶DNA两条链的3’末端。
C.引物延伸：在DNA聚合酶催化下，引物沿着靶DNA3’末端向5’末端延伸。

第8题：

关于聚合酶链反应(PCR)的叙述不正确的是( )。

A、PCR方法需要特定的引物

B、PCR技术是一种体外DNA扩增技术

C、PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内DNA的复制

D、PCR技术能够快速特异地扩增任何目的基因或DNA

E、PCR技术需要在恒温环境进行

参考答案：E

第9题：

简述PCR扩增仪的操作规程。

正确答案: 普通PCR扩增仪的操作通常为打开电源，仪器自检，设置温度程序或调出储存的程序，运行即可。定量PCR扩增仪的操作一般都是先打开PCR仪电源，再打开相连电脑中的相应软件，分别设置温度程序、采集通道，并可根据不同仪器的要求进行一些特殊设置，在仪器中放好PCR管，盖好仪器，运行设置还的反应程序。关机是通常先关软件，再关PCR仪，最后关电脑。

第10题：

cDNA末端快速扩增法的主要操作步骤是什么？

正确答案: 1.获得高质量总RNA：含有大量完整mRNA、tRNA、rRNA和部分不完整mRNA；
2.去磷酸化作用：带帽子结构的mRNA不受影响；
3.去掉mRNA的5‘帽子结构，加特异性RNA寡聚接头并用RNA连接酶连接；
4.以特异性寡dT为引物，在反转录酶的作用下，反转录合成第一条cDNA链，包含了寡接头的互补序列；
5.分别以第一链cDNA为模板进行RACE反应；
6.将纯化的PCR产物克隆到载体DNA中，进行序列分析。

什么是PCR扩增法，其原理、操作步骤、反应过程和意义？

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