简述构建突变基因文库的主要过程。

题目

简述构建突变基因文库的主要过程。

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相似问题和答案

第1题:

核酸分子杂交可用于


A.特异基因的检测
B.基因文库的筛选
C.某些突变基因的检测
D.基因表达的检测

答案:A,B,C,D
解析:

第2题:

要从突变基因文库中筛选得到人们所需的正突变基因,筛选工作量很大,必需采用各种()。


正确答案:高通量筛选技术

第3题:

下列哪些载体常用于构建基因文库 ( )

A、质粒

B、粘粒

C、反转录病毒

D、Prion

E、大肠杆菌


参考答案:B

第4题:

定点突变技术在酶分子修饰中有什么作用?简述其主要技术过程。


正确答案:作用:通过定点突变技术或是化学方法,将酶蛋白分子中的某个氨基酸残基置换为另一个氨基酸残基,观察其对酶催化反应的影响和变化,分析了解该氨基酸残基在酶催化过程中的作用。
技术过程:
A、基因序列分析
B、蛋白质结构分析
C、酶活性中心分析
D、引物设计进行基因定点突变
E、酶基因克隆表达
F、变异特性分析

第5题:

简述构建质粒载体的基本策略和构建过程。


正确答案: (一)基本策略
1、能在受体细胞内有效的复制;
2、必须含有允许外源DNA片段克隆的位点,切尽可能的多;
3、含有供选择克隆子的标记基因;
4、载体DNA分子尽可能小。
(二)构建过程
1、选择合适的出发质粒(亲本质粒);
2、正确获得构建质粒克隆载体的元件;
3、选择合适的选择标记基因;
4、在能达到预期目的的前提下,过程力求简单。

第6题:

基因文库的构建对重组子的筛选举出3种方法并简述过程。


正确答案: 抗生素抗性筛选、抗性的插入失活、兰-白斑筛选或PCR筛选、差式筛选、DNA探针
多数克隆载体均带有抗生素抗性基因(抗氨苄青霉素、四环素)。当质粒转入大肠杆菌中后,该菌便获得抗性,没有转入的不具有抗性。但不能区分是否已重组。
在含有两个抗性基因的载体中,如果外源DNA片段插入其中一个基因并导致该基因失活,就可用两个分别含不同药物的平板对照筛选阳性重组子。如pUC质粒含LacZ基因(编码β半乳糖苷酶)该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色,从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后,LacZ基因不能表达,菌株呈白色,以此来筛选重组细菌。

第7题:

构建基因文库一般使用的载体是() I质粒;IIλ-DNA;IIICosmid

  • A、I
  • B、II
  • C、III
  • D、II+III
  • E、I+II+III

正确答案:E

第8题:

简述安全评价机构建立过程控制体系的主要依据。


正确答案:

第9题:

何谓易错PCR技术?简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程


正确答案:指从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行PCR,使扩增得到的基因出现碱基配对错误,从而引起基因突变的技术过程。
过程:双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。

第10题:

简述定点突变技术的主要技术过程及其在酶分子修饰中的应用。


正确答案:定点突变是20世纪80年代发展起来的一种基因操作技术,是指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的改变从而获得突变基因的操作技术。定点突变技术是氨基酸置换修饰和核苷酸置换修饰的常用方法,也是蛋白质工程的常用技术。
(1)主要过程:
1.新的酶分子结构的设计;
2.突变基因碱基序列的确定;
3.突变基因的获得;
4.新酶的获得。
(2)应用:
1.酪氨酰-tRNA合成酶的修饰是将第51位的苏氨酸由脯氨酸置换,苏氨酸的密码子是ACU、ACC、ACA、ACG,脯氨酸的密码子是CUU、CCC、CCA、CCG,在mRNA上只需将密码子上的第一个A换成C,在对应的基因上只需将T换成G即可达到置换的目的。
2.T4溶菌酶的修饰是将第3位以异亮氨酸(密码子为AUU、AUC、AUA,对应基因上的碱基次序为TAA、TAG、TAT)置换成半胱氨酸(密码子为UGU、UGC,对应基因上的碱基次序为ACA、ACG),只需在对应基因的位点上置换两个碱基,由AC置换TA即可。