常用的蛋白质沉淀方法有哪些？有机溶剂沉淀蛋白质的机理什么？用乙醇沉淀蛋白质时应注意哪些事项？

题目

参考答案和解析

正确答案: ①常用的蛋白质沉淀方法有：
蛋白质盐析沉淀、蛋白质等电点沉淀、有机溶剂沉淀法及运用沉淀动力学沉淀法等。
②有机溶剂沉淀蛋白质的机理是：
向蛋白质溶液中加入有机溶剂，水的活度降低。随着有机溶剂溶度的增大，水对蛋白质分子表面荷电基团的水化程度降低，液体的介电常数下降，蛋白质分子间的静电引力增大，从而凝聚和沉淀。
③用乙醇沉淀蛋白质时应注意的事项：
1、低温条件下操作可以提高收率和减少蛋白质失活变性（加入有机溶剂为放热反应）；
2、采用的有机溶剂必须与水互溶，与蛋白质不发生作用；
3、蛋白质分子量越大，需要加入的溶剂量越少；
4、一种蛋白质的溶解度常会因为另一种蛋白质存在而降低；
5、沉淀的蛋白如果不能再被溶解，可能已经变性；
6、很多酶和蛋白质在20-50%（V/V）就能产生沉淀；当溶剂量达到50%时，通常只有分子量≤1500的蛋白留在溶液中；
7、PH=PI时，需要加入的溶剂量减少；
8、盐析法沉淀的蛋白质采用有机溶剂精制时必须与先进行透析。

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第1题：

使蛋白质沉淀但不变性的方法有（）。

A、中性盐沉淀蛋白
B、鞣酸沉淀蛋白
C、低温乙醇沉淀蛋白
D、重金属盐沉淀蛋白

正确答案:A,C

第2题：

常用的蛋白质沉淀法不包括（）

A、盐析法
B、有机溶剂沉淀
C、某些酸类沉淀
D、重金属盐沉淀
E、某些碱类沉淀

正确答案:E

第3题：

从多种蛋白质混合液中分离纯化某种蛋白质，且不能变性，用下列哪种方法较好

A．加有机溶剂使蛋白质沉淀

B．加中性盐使蛋白质沉淀

C．用电泳分离

D．用生物碱试剂沉淀蛋白质

E．加重金属盐使蛋白质沉淀

正确答案：B

第4题：

使蛋白质沉淀但不变性的方法有（）。

A、鞣酸沉淀蛋白
B、低温乙醇沉淀蛋白
C、重金属盐沉淀蛋白
D、常温乙醇沉淀蛋白

正确答案:B

第5题：

为什么一些有机溶剂可使蛋白质沉淀？

正确答案:（1）酒精、甲醇、丙酮吸水性强，能破坏蛋白质胶粒上的水化层而使其沉淀（即破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀）
（2）有机溶剂沉淀蛋白质往往引起变性，如酒精消毒。

第6题：

蛋白质沉淀有哪几类方法？主要基于哪种机理？

正确答案: 有中性盐盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂沉淀法，非离子型聚合物沉淀法，聚电解质沉淀法，金属离子沉淀法。
中性盐盐析法是基于在蛋白质溶液中加入中性盐后会压缩扩散双电层、降低电位，即中性盐即会使蛋白质脱水，又会中和蛋白质所带的电荷，使颗粒间相互排斥力失去，在布朗运动的相互碰撞下，蛋白质分子结合成聚集物而沉淀析出。
等电点沉淀法是基于不同蛋白质离子具有不同等电点这一特性（蛋白质在等电点时溶解度最小），用依次改变溶液pH值的办法，将杂蛋白沉淀除去。
有机溶剂沉淀法是基于加入有机溶剂后，会使水溶液的介电常数降低，而使蛋白质分子之间的静电引力增大，导致凝聚和沉淀。
非离子型聚合物沉淀法是基于体积不相容性。
聚电解质沉淀法是基于蛋白质与聚电解质结合形成一个多分子络合物，当络合物超过游离蛋白质的溶解度极限值使，就发生沉淀。
金属离子沉淀法是基于它们能与蛋白质分子中的特殊部位起反应造成的。

第7题：

蛋白质有机溶剂沉淀的影响因素有哪些？

正确答案: 1.温度需控制在低温下进行
2.溶液PH
3.离子强度较低的离子强度往往有利于沉淀
4.金属离子的助沉作用

第8题：

从多种蛋白质混合液中分离纯化某种蛋白质，且不能变性，用下列哪种方法较好（）

A、加有机溶剂使蛋白质沉淀

B、加中性盐使蛋白质沉淀

C、用生物碱试剂沉淀蛋白质

D、用电泳分离

E、加重金属盐使蛋白质沉淀

参考答案：B

第9题：

蛋白质常用的有机溶剂沉淀过程中常用的有机溶剂为（）。

正确答案:乙醇和丙酮

第10题：

常用沉淀蛋白质的方法有（）、（）、（）、（）和（）。

正确答案:盐析沉淀；有机溶剂沉淀；加热沉淀；重金属盐沉淀；生物碱试剂沉淀

常用的蛋白质沉淀方法有哪些？有机溶剂沉淀蛋白质的机理什么？用乙醇

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