问答题简述疏水层析的原理，并说明基本操作步骤？

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简述疏水层析的原理，并说明基本操作步骤？

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相似问题和答案

第1题：

柱层析的基本操作包括哪些步骤？

正确答案:（1）装柱
（2）层析柱的平衡
（3）加样
（4）洗脱
（5）分离物质的收集、鉴定及保存
（6）基质的再生

第2题：

简述亲和层析基本操作步骤。

正确答案: （1）选择适当的配体
（2）将配体固定化到基质上
（3）将目的蛋白混合液加样到基质上
（4）除去非特异性结合的蛋白质
（5）洗脱纯的目的蛋白

第3题：

简述疏水色谱的原理，并说明基本操作步骤。

正确答案: 原理：高浓度盐溶液中，亲水性较强的物质，分子内部的疏水基团外露，便可与疏水的固定相以疏水作用力相结合（吸附）。由于这种作用力大小不同，可以通过改变极性流动相的离子强度（由高到低）使其依次解吸附。即高浓度的盐溶液可将吸附力弱（小）（极性大）的物质先洗脱下来，而低浓度的盐则使吸附力强（大）（极性小）的物质被后洗脱下来。
注意：只有对极性很强的物质，才需在流动相中添加有机溶剂，以降低极性，使其解吸附。此时，须注意防止有效成分变性。
操作：
1.色谱柱和吸附剂的选择色谱柱规格：类似普通色谱。当被分离样品量较大时、被分离物与杂质间的疏水性差异较大时，选用体积较大的柱子（h：d≤3）。固定相选择：根据要分离物质的特点，结合吸附剂的性能进行选择。
2.装柱先将吸附剂悬浮于乙醇溶液中→浸泡离心→弃上清，收沉淀→50%（m/V）浓度悬浮于样品缓冲溶液中装柱（同常规）。
3.加样：样品预处理：补加盐→混匀→放置（片刻）上柱→吸附（0.5～1h）。
4.洗脱：平衡液洗涤浓度由高→低。即先用高离子强度的平衡液洗涤，再用低离子强度的平衡液洗脱。同时，收集和检测。
5.柱再生：用8mol/L的脲素溶液（或其缓冲溶液）洗涤（除杂）→平衡缓冲液平衡。

第4题：

疏水柱层析分离原理是什么？

正确答案:亲水性蛋白质（酶）表面均含有一定量的疏水性基团。尽管在水溶液中蛋白质（酶）具有将疏水性基团折叠在分子内部而表面显露极性和荷电基团的趋势，但总会有一些疏水性基团或极性基团的疏水部位暴露在蛋白质（酶）表面。这部分疏水基团可与亲水性固定相表面偶联的短链烷基、苯基等弱疏水基会发生疏水性相互作用，被固定相（疏水性吸附剂）所吸附。

第5题：

疏水柱层析分离原理？

正确答案: 亲水性蛋白质（酶）表面均含有一定量的疏水性基团。尽管在水溶液中蛋白质（酶）具有将疏水性基团折叠在分子内部而表面显露极性和荷电基团的趋势，但总会有一些疏水性基团或极性基团的疏水部位暴露在蛋白质（酶）表面。这部分疏水基团可与亲水性固定相表面偶联的短链烷基、苯基等弱疏水基会发生疏水性相互作用，被固定相（疏水性吸附剂）所吸附。

第6题：

简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析的原理和操作要点？

正确答案:离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。
操作：a上样：上样体积不十分严格。b洗脱：增加溶液的离子强度c梯度洗脱法：改变溶液的pHd再生：用0.5mol/LNaOH和0.5mol/LNaCl混合溶液或0.5mol/LHCl处理。凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。
操作：a凝胶的选择和处理，根据相对分子质量范围选择相应型号的凝胶介质。将干胶悬浮于5-10倍的蒸馏水中，充分溶胀，抽气，装柱。b柱的选择：采用L/D比值高的柱子，可提高分辨率，但影响流速。c加样：体积不能过多，不超过凝胶床体积的5％，脱盐时可在10％左右。d洗脱：洗脱液与平衡时用的buffer一致。洗速不可过快，保持恒速。e胶的保存：洗脱完毕后，凝胶柱已恢复到上柱前的状态，不必再生处理。
亲和层析原理：利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯。

第7题：

例举两种新型的疏水层析技术，说明其原理。

正确答案: 1）亲硫性疏水层析
该技术主要在疏水作用的基础上增加了硫元素的相互作用。利用层析介质与含硫蛋白质和非硫蛋白质的亲硫性差异，对蛋白质加以分离。
2）疏水电荷诱导层析（HCIC.
HCIC的配基中含有吡啶环，中性时不会带有电荷，而随着pH值的降低，吡啶环中的氮原子会带有正电荷，这样和带同样电荷的蛋白质发生排斥，从而实现解吸。

第8题：

简述吸附柱层析的基本原理。

正确答案: ①将溶解于适当溶剂中的A、B两种物质通过装有吸附剂的层析柱，由于A、B两种物质性质不同，
②它们在柱上的移动速度有差异，从而呈现出两个明显的色带。

第9题：

简述疏水层析的原理，并说明基本操作步骤？

正确答案: 在载体表面连接上疏水的直链碳链或其他疏水基团，可以与蛋白质的某些疏水基团相互作用，从而实现多组分的分离。
在高盐浓度下，蛋白质表面的疏水区域暴露，固定相表面修饰了一些疏水基团，这样蛋白质的疏水部分即可与固定相发生较强的疏水相互作用，从而被结合在固定相表面，而一旦降低流动相的盐浓度即可实现蛋白质的洗脱。

第10题：

简述吸附柱层析操作步骤。

正确答案: ①装柱：柱高：直径为15∶1~20∶1。分干法、湿法装柱两种。
②加样：将样品溶于洗脱剂后上柱或样品溶于甲醇或丙酮等中，加一定量吸附剂，蒸去溶剂后均匀地加入柱顶。
③洗脱和收集。

简述疏水层析的原理，并说明基本操作步骤？

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