写出三种分离纯化酶蛋白的方法,并简述其原理.

题目
问答题
写出三种分离纯化酶蛋白的方法,并简述其原理.
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相似问题和答案

第1题:

比较蛋白质的分离纯化技术中凝胶过滤和超过滤方法的原理。


正确答案:凝胶过滤和超过滤都是蛋白质分离纯化过程中常用的技术,但是其原理和操作都不相同。凝胶过滤是根据蛋白质分子的大小将样品中的各种蛋白质分子分开,具体操作是将样品通过装有一定规格凝胶的凝胶过滤柱,小分子的蛋白质进入凝胶孔内,大分子的蛋白质留在外面,然后用洗脱液洗脱,蛋白质依分子大小被洗脱,然后是小分子的蛋白质。超过滤是利用蛋白质分子不能穿过半透膜的特性除去蛋白质混合物中的小分子物质,具体操作是将样品装入透析袋,然后利用高压或离心力,迫使蛋白质样品中的非蛋白的小.分子溶质通过半透膜,蛋白质留在透析袋内。

第2题:

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种?各自的原理是什么?


正确答案: 1、沉淀:向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液,可使蛋白质的溶解度降低,而从溶液中析出。
2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析:A.离子交换层析,利用蛋白质的两性游离性质,在某一特定pH时,各蛋白质的电荷量及性质不同,故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析,含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛,又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内,滞留时间长,大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心:既可以用来分离纯化蛋白质,也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。

第3题:

简述生物活性物质分离纯化方法的主要原理。


正确答案:一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的,如电泳,超速离心,超滤等。

第4题:

写出5种常用阀门名称并简述其工作原理?


正确答案: (1)闸阀:工作原理:闸阀的闸报沿阀座中心线的垂直方向移动,使闸阀板密封面贴合,并依靠顶楔、弹簧或闸阀的楔形来增强密封条,从而阻止介质通过。
(2)截止阀:截止阀的阀瓣沿阀座中心垂直移动,依靠阀杆螺纹的施压,使阀瓣密封面紧贴密贴合,从而截止介质流通。
(3)单向阀:依靠流体本身的压力变化,使关闭件在阀体内摆动或移动,来自动启闭管路,限制介质逆向流动。
(4)蝶阀:蝶阀阀瓣为一圆盘,可围绕阀座内的轴旋转来达到启闭目的。
(5)球阀:球阀的阀瓣为一通心球体,用球体绕阀体中心做旋转,以达到启闭的目的。

第5题:

简述蛋白质类药物的分离纯化方法?


正确答案: ①沉淀法
②按分子大小分离的方法
③按分子所带电荷进行分离的方法
④亲和层析法

第6题:

试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。


正确答案: 串联亲和纯化(TAP),用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用,通过嵌入一段蛋白质标记,在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记,这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上,使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当,避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化,在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来,这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤:
(1)蛋白质标记:由蛋白A的IgG结合区(ProtA)和钙调蛋白结合区(CBP)构成,中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开;
(2)构建表达标记蛋白的细胞或组织:将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位;
(3)细胞抽提物的准备;
(4)串联亲和纯化;
(5)蛋白质复合体的鉴定。

第7题:

色谱方法共分几类?常用的蛋白质分离方法有哪些?并简述其原理


正确答案: 吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱

第8题:

简述生物活性物质分离纯化的主要原理。


正确答案: 生物大分子分离纯化的主要原理是:
1)根据分子形状和大小不同进行分离,如差速离心与超离心、膜分离、凝胶过滤等;
2)根据分子电离性质(带电性)差异进行分离,如离子交换法、电泳法、等电聚焦法;
3)根据分子极性大小及溶解度不同进行分离,如溶剂提取法、逆流分配法、分配层析法、盐析法、等电点沉淀及有机溶剂分级沉淀等;
4)根据物质吸附性质的不同进行分离,如选择性吸附与吸附层析等;
5)根据配体特异性进行分离,如亲和层析法等

第9题:

谷糙分离有哪三种常用的方法?简述其中一种分离方法的原理?


正确答案:1。筛选法:利用稻谷和糙米粒度的差异及其自动分级特性进行分离,常用的设备是谷糙分离平转筛2.比重分离法:利用稻谷和糙米比重不同及其分组性进行分离,常用的设备是;重力谷糙分离机3.弹性分离法:利用稻谷和糙米弹性差异及其自动分级特性,面进行谷糙分离,常用的设备是:撞击谷糙分离机。

第10题:

写出三种分离纯化酶蛋白的方法,并简述其原理.


正确答案:方法透析与超虑离心分离凝胶过滤盐析等电点沉淀共沉淀吸附层析电泳亲和层析热变性酸碱变性表面变性等离子交换层析原理:根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。凝胶层析原理:利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内,在凝胶颗粒之间的空隙向下移动,并最先被洗脱出来;小分子物质可自由出入凝胶孔,流程长而后流出层析柱。等电点沉淀法原理:蛋白质在等电点时溶解度最低;不同的蛋白质具有不同的等电点使用方法:单独使用较少(用于从粗酶液中除去某些等电点相距较大的杂蛋白),多与其它方法联使用(如盐析法、有机溶剂法),因蛋白质在等电点时仍有一定的溶解度.亲和层析原理:利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上,待纯化的物质可被配体吸附,杂质则不被吸附,从层析柱流出,变换洗脱条件,即可将分离的物质洗脱下来,实现分离提纯