简述酶纯化的方法及原理。

题目

简述酶纯化的方法及原理。

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相似问题和答案

第1题:

简述用萃取法纯化皂甙的原理和方法?


正确答案:利用一些极性较大又可与水分层的有机溶剂自水溶液中萃取皂甙,借此与水中极性更大的杂质分离。其方法是将粗总甙的水溶液,加食盐饱和,用正丁醇或戊醇反复萃取,合并萃取液,减压浓缩即得较纯的总皂甙。

第2题:

盐析法纯化酶类是根据()进行纯化。

  • A、根据酶分子电荷性质的纯化方法
  • B、调节酶溶解度的方法
  • C、根据酶分子大小、形状不同的纯化方法
  • D、根据酶分子专一性结合的纯化方法

正确答案:B

第3题:

简述生物活性物质分离纯化的主要原理。


正确答案: 生物大分子分离纯化的主要原理是:
1)根据分子形状和大小不同进行分离,如差速离心与超离心、膜分离、凝胶过滤等;
2)根据分子电离性质(带电性)差异进行分离,如离子交换法、电泳法、等电聚焦法;
3)根据分子极性大小及溶解度不同进行分离,如溶剂提取法、逆流分配法、分配层析法、盐析法、等电点沉淀及有机溶剂分级沉淀等;
4)根据物质吸附性质的不同进行分离,如选择性吸附与吸附层析等;
5)根据配体特异性进行分离,如亲和层析法等

第4题:

如何对酶分离纯化方法及工艺程序的优劣进行评价?


正确答案:一个完整的酶制备方案包括酶测定方法的建立、材料的选择、预处理对酶性质的初步探索、制定酶的纯化程序、酶成品的保存。
评价分离纯化方法及工艺程序优劣的指标:
1.活力的回收率
2.化倍数:比活力提高的倍数
因此在酶的分离纯化过程中必需测定每一步的酶液体积(mL)、蛋白含量(mg/mL)、酶活(U/mL).

第5题:

简述酶活力测定方法的原理


正确答案:直接测定法:有些酶促反应进行一段时间后,酶底物或产物的变量可直接检测。
间接测定法:有些酶促反应的底物或产物不易直接检测,一次必须与特定的化学试剂反应,形成稳定的可检测物。
酶偶联测定法:与间接测定法相类似,只是使用一指示酶,使第一酶的产物在指示酶的作用下转变成可测定的新产物。

第6题:

分子筛层析纯化酶是根据()进行纯化。

  • A、根据酶分子电荷性质的纯化方法
  • B、调节酶溶解度的方法
  • C、根据酶分子大小、形状不同的纯化方法
  • D、根据酶分子专一性结合的纯化方法

正确答案:C

第7题:

写出三种分离纯化酶蛋白的方法,并简述其原理.


正确答案:方法透析与超虑离心分离凝胶过滤盐析等电点沉淀共沉淀吸附层析电泳亲和层析热变性酸碱变性表面变性等离子交换层析原理:根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。凝胶层析原理:利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内,在凝胶颗粒之间的空隙向下移动,并最先被洗脱出来;小分子物质可自由出入凝胶孔,流程长而后流出层析柱。等电点沉淀法原理:蛋白质在等电点时溶解度最低;不同的蛋白质具有不同的等电点使用方法:单独使用较少(用于从粗酶液中除去某些等电点相距较大的杂蛋白),多与其它方法联使用(如盐析法、有机溶剂法),因蛋白质在等电点时仍有一定的溶解度.亲和层析原理:利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上,待纯化的物质可被配体吸附,杂质则不被吸附,从层析柱流出,变换洗脱条件,即可将分离的物质洗脱下来,实现分离提纯

第8题:

试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。


正确答案: 串联亲和纯化(TAP),用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用,通过嵌入一段蛋白质标记,在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记,这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上,使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当,避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化,在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来,这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤:
(1)蛋白质标记:由蛋白A的IgG结合区(ProtA)和钙调蛋白结合区(CBP)构成,中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开;
(2)构建表达标记蛋白的细胞或组织:将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位;
(3)细胞抽提物的准备;
(4)串联亲和纯化;
(5)蛋白质复合体的鉴定。

第9题:

简述酶结晶的主要方法和原理?


正确答案:(1)盐析结晶法:在适当的温度和PH值等条件下,于接近饱和的酶液中缓慢增加某种中性盐的浓度,使酶的溶解度缓慢降低,达到稍微过饱和状态,而析出酶晶体的过程
(2)有机溶剂结晶法:在接近饱和的酶液中缓慢增加某种有机溶剂,使酶的溶解度缓慢降低,而析出酶晶体的过程
(3)透析平衡结晶法:将酶液装进透析袋,对一定浓度的盐溶液进行透析,使酶液逐步达到过饱和状态而析出结晶的过程。前提:酶液要达到一定纯度(经过纯化)酶液要浓缩到一定浓度
(4)等电点结晶法:通缓慢加入浓酶液的PH值、使之逐渐达到酶的等电点,而析出酶晶体的过程

第10题:

简述酶分离纯化方法及工艺程序的选择策略。


正确答案:(1)先选用非特异的、低分辨的技术,去除主要的杂质并使酶溶液浓缩;如沉淀、超滤和吸附等。
(2)随后采用高效分离的手段;如离子交换层析、亲和层析。
(3)将最昂贵、最费时的分离单元放在最后阶段。如凝胶过滤层析。