问答题简述酶结晶的主要方法和原理？

题目

问答题

简述酶结晶的主要方法和原理？

参考答案和解析

正确答案：（1）盐析结晶法：在适当的温度和PH值等条件下，于接近饱和的酶液中缓慢增加某种中性盐的浓度，使酶的溶解度缓慢降低，达到稍微过饱和状态，而析出酶晶体的过程
（2）有机溶剂结晶法：在接近饱和的酶液中缓慢增加某种有机溶剂，使酶的溶解度缓慢降低，而析出酶晶体的过程
（3）透析平衡结晶法：将酶液装进透析袋，对一定浓度的盐溶液进行透析，使酶液逐步达到过饱和状态而析出结晶的过程。前提：酶液要达到一定纯度（经过纯化）酶液要浓缩到一定浓度
（4）等电点结晶法：通缓慢加入浓酶液的PH值、使之逐渐达到酶的等电点，而析出酶晶体的过程

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第1题：

简述聚合酶链反应（PCR）方法的原理和应用。

正确答案:PCR是体外DNA扩增技术，是利用耐热DNA聚合酶及天然复制螺旋结构的原理，使极微量DNA片断在短时间内通过变性、退火、延伸等循环周期扩增到106-107倍，达到极易检测DNA的敏感方法。具有高度敏感、操作简便、快速等特点。目前，此法已在医学中广泛应用，如病原体DNA检测，细胞因子、T细胞受体、免疫球蛋白及补体研究，肿瘤基因、遗传基因检测，遗传性疾病的产前诊断及DNA克隆、重组，基因工程等；但要选择适当的阳性和阴性对照，以排除假阴性和假阳性。

第2题：

简述乳糖的结晶原理，乳糖的结晶分为几种？

正确答案: 乳糖结晶与组织状态的关系。乳糖形成微细的结晶，并悬浮于炼乳中，组织柔润细腻，如果结晶晶粒较大。
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第3题：

简述呼吸仪的测定原理和主要测定方法。

正确答案:呼吸仪可以测定活性污泥的呼吸速率，呼吸速率是单位时间单位体积的微生物所消耗的溶解氧的量。呼吸速率反映了活性污泥最重要的两个生化过程：微生物的生长和底物的消耗。呼吸仪也可成为BOD监测仪，但不要与BOD5相混淆，因为呼吸仪是在几分钟内使用适应废水性质的微生物来测定其所消耗的溶解氧的量。

第4题：

结晶时酶液有什么要求？结晶方法有哪些？其原理又如何？

正确答案:结晶时对酶液有以下要求：
A.酶在结晶之前，酶液必须经过纯化达到一定的纯度。如果酶液纯度太低，不能进行结晶。通常酶的纯度应当在50%以上，方能进行结晶。
B.酶在结晶时，酶液应达到一定的浓度。结晶时酶液浓度应当控制在介稳区，即酶浓度处于稍微过饱和的状态。
C.结晶过程中还要控制好温度、pH值、离子强度等结晶条件。
结晶方法与原理：
A.盐析结晶法：在适当的温度和pH值等条件下，于接近饱和的酶液中缓慢增加某种中性盐的浓度，使酶的溶解度慢慢降低，达到稍微过饱和状态，而析出酶晶体的过程。
B.有机溶剂结晶法：有机溶剂结晶是在接近饱和的酶液中慢慢加入某种有机溶剂，使酶的溶解度降低，而析出酶晶体的过程。
C.透析平衡结晶法：将酶液装进透析袋，对一定浓度的盐溶液进行透析，使酶液逐步达到过饱和状态而析出结晶的过程。
D.等电点结晶法：等电点结晶是通过缓慢改变浓酶液的pH值，使之逐渐达到酶的等电点，而使酶析出结晶的过程。

第5题：

写出三种分离纯化酶蛋白的方法，并简述其原理.

正确答案:方法透析与超虑离心分离凝胶过滤盐析等电点沉淀共沉淀吸附层析电泳亲和层析热变性酸碱变性表面变性等离子交换层析原理：根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法。凝胶层析原理：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；小分子物质可自由出入凝胶孔，流程长而后流出层析柱。等电点沉淀法原理：蛋白质在等电点时溶解度最低；不同的蛋白质具有不同的等电点使用方法：单独使用较少（用于从粗酶液中除去某些等电点相距较大的杂蛋白），多与其它方法联使用（如盐析法、有机溶剂法），因蛋白质在等电点时仍有一定的溶解度.亲和层析原理：利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子.体通过适当的化学反应共价的连接到载体上，待纯化的物质可被配体吸附，杂质则不被吸附，从层析柱流出，变换洗脱条件，即可将分离的物质洗脱下来，实现分离提纯

第6题：

简述结晶操作的原理

正确答案: 当溶液处于过饱和状态时，分子间的分散或排斥作用小于分子间的相互吸引作用。
结晶是一个以过饱和度为推动力的质量与能量的传递过程。

第7题：

简述结晶法的原理和操作。

正确答案:结晶法是利用混合物中各化合物对某种溶剂的溶解度的差别，而使单一成分以结晶状态析出。结晶法的操作是把事先已经过分离得到较纯的混合物，加入适合的溶剂，加热溶解，形成饱和溶液。趁热滤去不溶的杂质，滤液低温放置或蒸发出部分溶剂，使主要成分析出结晶与留在母液中杂质分离。

第8题：

简述酶的提取和结晶方法。

正确答案: 提取方法：
（1）水溶液法：常用稀盐溶液或缓冲液提取。
（2）有机溶剂法：某些结合酶如微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂质牢固结合，为此必须除去结合的脂质，且不能使酶变性，最常用的有机溶剂是丁醇。
（3）表面活性剂法：表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，可用于提取结合酶，此法用得较少。
结晶方法：盐析法；有机溶剂法；复合结晶法；透析平衡法；等电点法。

第9题：

酶结晶的原理是什么？影响酶结晶的主要因素？

正确答案:酶结晶的原理：通过缓慢地改变母液中酶蛋白溶解度，使酶略处于过饱和状态，再配合适当结晶条件，从而得到酶的晶体。
影响酶蛋白结晶的因素众多，具体可分为物理因素、化学因素、和生物化学因素。
物理因素：达到平衡的方法、温度、重力、压力、介质的电解质性质和黏度、均相或非均相成核等。
化学因素：PH、沉淀剂类型和浓度、离子种类和强度、过饱和度、氧化/还原环境、酶浓度、交联体、去垢剂和杂质的存在等。
生物化学因素：酶纯度、抑制剂、酶蛋白的聚集状态、酶水解、化学和遗传修饰、蛋白质自身的对称性、稳定性和等电点等。

第10题：

简述酶结晶的主要方法和原理？

正确答案:（1）盐析结晶法：在适当的温度和PH值等条件下，于接近饱和的酶液中缓慢增加某种中性盐的浓度，使酶的溶解度缓慢降低，达到稍微过饱和状态，而析出酶晶体的过程
（2）有机溶剂结晶法：在接近饱和的酶液中缓慢增加某种有机溶剂，使酶的溶解度缓慢降低，而析出酶晶体的过程
（3）透析平衡结晶法：将酶液装进透析袋，对一定浓度的盐溶液进行透析，使酶液逐步达到过饱和状态而析出结晶的过程。前提：酶液要达到一定纯度（经过纯化）酶液要浓缩到一定浓度
（4）等电点结晶法：通缓慢加入浓酶液的PH值、使之逐渐达到酶的等电点，而析出酶晶体的过程

简述酶结晶的主要方法和原理？

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