问答题简述动物细胞培养工艺条件的控制。

题目

问答题

简述动物细胞培养工艺条件的控制。

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第1题：

如何控制动物细胞培养基的质量？

正确答案:培养用水质：必须按照GMP要求进行制备，除去普通水中的各类元素、有毒或有害物质及微生物和热源，达到纯水标准。
缓冲液：H₂CO₃/NaCHO₃；NaH₂PO₄/Na₂HPO₄；恒定pH。
平衡盐溶液：BBS，由NaCl、无机盐和葡萄糖、缓冲剂、指示剂组成。满足细胞对盐离子、碳营养要求；pH和渗透压要求；直观观察pH。
磷酸盐缓冲液：PBS，KCl、KH₂PO₄、NaCl、NaHPO₄。培养物、器皿的洗涤液。氨基酸配置：50倍浓缩液。使用L型氨基酸，对于DL混合型氨基酸，使用量应该加倍。谷氨酰胺不稳定，需单独配置（100倍浓缩液，-20℃保存）。

第2题：

简述动物细胞培养及其分类。

正确答案: 动物细胞培养：离散的动物活细胞在体外人工无菌生长增殖，整个过程中细胞不分化，不形成组织。
培养细胞分类：悬浮型和贴附型。悬浮型，呈悬浮状态生长的细胞；贴附型，贴附于支持物生长的细胞。

第3题：

动物细胞培养的条件是什么?

参考答案：温度:哺乳类37昆虫25~28，ph7.2~7.4，通氧量：使用co2培养箱，不同动物比例不同。防止污染，基本营养物质：三大营养物质+维生素，激素，促细胞生长因子，渗透压：大多数260~320。

第4题：

试述植物细胞培养产酶的工艺条件及其控制。

正确答案:（1）植物细胞培养的工艺流程：
①外植体的选择与处理；
②植物细胞的获取：直接分离法、愈伤组织诱导法、原生质体再生法；
③细胞悬浮培养；
④分离纯化。
（2）植物细胞培养的培养基：
①特点：需要大量无机盐、多种维生素和植物生长激素、无机氮源、蔗糖为碳源；
②常用：MS培养基（无机盐浓度较高，为较稳定的离子平衡溶液，营养成分的种类和比例较适宜，可以满足植物细胞的营养要求，其中硝酸盐的浓度比其他培养基高，故广泛应用于植物细胞、组织和原生质体培养）、B5培养基、White培养基、KM-8P培养基。
（3）温度的控制，通常不低于20度不高于35度。
（4）pH的控制：培养基一般是5.5~5.8之间。
（5）溶解氧的调节控制。
（6）光照的控制。
（7）前体的添加。
（8）刺激剂的应用。

第5题：

简述植物细胞培养产酶的工艺条件控制。

正确答案:一、培养基；
（1）生长和代谢需要大量无机盐；
（2）需要多种维生素和植物生长激素；
（3）需求的氮源一般为无机氮源；
（4）一般以蔗糖为碳源、浓度为2-5%。
二、培养温度和pH；
（1）适宜温度在20℃-25℃，酶合成温度因植物种类而异；
（2）要求稳定的pH，一般控制在pH5.8-6.1最好。
三、通气和搅拌；耗氧速率较慢，细胞比较大，较脆弱，对剪切力敏感，所以，通气和搅拌不能太强烈。
四、其他；
（1）光照：对一些植物酶有诱导作用或抑制作用。
（2）刺激物：在酶合成时期，适当添加。

第6题：

简述动植物细胞培养各自的工艺流程。

正确答案: 动物细胞培养：组织切碎→加蛋白酶处理→单个细胞→收集细胞离心→营养培养基培养→增殖至覆盖瓶壁表面→加酶消化→接种若干培养瓶（扩大培养）→种子（液氮保存）→解冻、复活培养和扩大培养→大规模反应器生产
植物细胞培养：植物体部分组织或种子灭菌消毒→发芽→半固体培养基上培养→愈伤组织→液体培养基振荡培养→继代培养

第7题：

简述食品冷藏工艺的控制条件。

正确答案: （1）冷藏温度：一般略高于冻结温度。若用较高温度则贮期缩短，产生果皮斑点病；如用较低温度，则会产生低温冷害或寒冷收缩。
（2）空气湿度及流速：湿度，应适宜。如过高，则有冷水产生，易霉烂。如过低则使食品萎缩。流速：尽量慢。如过快，则会引起食品的干缩；如空气不流动，则会造成温度不均匀。
（3）气调贮藏：氧气下降至2%至4%，CO2升高至3%到5%，适当低温。
（4）混藏：贮温略高。偏高会缩短贮期，偏低，则会产生冷害。
（5）分藏：防止食品窜味。

第8题：

选择下列正确的答案（）。

A、动植物细胞培养都需要无菌的条件
B、动物细胞培养需要无菌的条件
C、植物细胞培养需要无菌的条件
D、动植物细胞培养都不需要无菌的条件
E、无菌条件不利于植物细胞培养

正确答案:A,B,C

第9题：

动物细胞培养过程中要注意哪些工艺条件。

正确答案:（1）动物细胞培养基的组成成分：氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖、激素、生长因子等。
（2）动物细胞培养基的配制。
（3）温度的控制。
（4）pH的控制。
（5）渗透压的控制。
（6）溶解氧的控制。

第10题：

简述动物细胞培养的特点与营养需求。

正确答案:针对动物细胞培养的各种方法，相应的培养特点：
1、转瓶（管）培养系统
（特点）优点：结构简单，投资少，技术熟练，重复性好，放大只需要简单地增加转瓶（管）数量。
缺点：劳动强度大，占地空间大，单位体积提供细胞生长的表面积小，细胞生长密度低，培养时监测和控制环境条件受限制。
2、反应器贴壁培养
细胞贴附于固定的表面生长，不因为搅拌而跟随培养基一起流动。
（特点）优点：比较容易更换培养基，不需要特殊的分离和培养设备。
缺点：扩大规模较难，不能直接监控细胞生长情况。
3、悬浮培养法，主要用于非贴壁依赖型细胞的培养。如杂交瘤细胞、淋巴细胞、和许多肿瘤细胞等。
特点：用于实验室的普通悬浮反应器，是一种带有搅拌器的旋转瓶。
4、固定化培养，固定化培养是将动物细胞与非水溶性载体结合起来，在生物反应器中进行大规模培养的方法。
特点：具有细胞生长密度高，抗剪应力和抗污染能力强，细胞易与产物分开，利于产物分离和纯化。
针对与植物细胞培养的区别（即思考题7），动物细胞的培养有一下特点：
A.培养基不同：植物细胞（固体培养基），动物细胞（液体培养基）
B.培养基的成分不同：动物细胞培养必须利用动物血清，植物组织培养则不需要。
C.产物不同：植物组织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性，因此得到的是同一种的细胞。
D.原理不同：植物组织培养的原理为植物细胞的全能性，动物细胞培养的原理为细胞的增殖。
营养需求：
①动物细胞培养液的成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。动物细胞培养成功的关键在于培养液中是否含有动物血清，因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。
②动物细胞培养液的特点：液体培养基、含动物血清。
③动物细胞培养的条件：无菌、无毒的环境；营养物质（合成培养基）；温度和pH（36.5±0.5℃，7.2～7.4）；气体环境（氧气和二氧化碳）等。

简述动物细胞培养工艺条件的控制。

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