问答题PCR反应包括哪些基本要素？

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PCR反应包括哪些基本要素？

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第1题：

简述PCR反应体系主要包括哪些组分。
P.CR反应组分：
①模板（特定序列的DNA分子）。
②两个特异寡核苷酸片段-引物primer，这一对引物位于欲扩增DNA区的两侧，与靶序列两端互补。
③耐热DNA聚合酶Taq酶以及酶的缓冲液-buffer。
④4种脱氧核糖核苷酸dNTP。
略

第2题：

荧光定量PCR结果中样品的Ct值受下列哪些因素的影响（）。

A、阈值设定
B、模版的起始浓度
C、PCR反应的循环数
D、引物的扩增效率

正确答案:A,B,D

第3题：

以下哪些酶可用于PCR反应

A、Klenow

B、HindⅢ

C、TaqDNA聚合酶

D、RNase

E、DNase

参考答案：AC

第4题：

PCR的基本反应过程包括：（）、（）、（）三个阶段。

正确答案:变性；退火；延伸

第5题：

一般PCR反应中包括几种基本成份？它们的功能分别是什么？

正确答案: 7种基本成分：模板，特异性引物，热稳定DNA聚合酶，脱氧核苷三磷酸（dNTP），二价阳离子，缓冲液及一价阳离子，石蜡油（可忽略）
模板：待扩增的DNA或RNA，甚至细胞；
引物：与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段，是决定PCR特异性的关键。只有每条引物都与靶DNA特异性结合，才能保证其特异性，引物越长，特异性越高。两段引物间的距离决定了扩增片断的长度；两引物的5’端决定了扩增产物的5’端位置。说明引物决定了扩增片断的长度、位置和结果。
DNA聚合酶：a.聚合作用，将dNTP中脱氧单核苷酸逐个加到3’-OH末端，b.3’-5’外切酶活性，校正功能，c.5’-3’外切酶活性，切除错配核苷酸；
石蜡油：维持恒热和整个体系中盐浓度，减少PCR过程中尤其是变性时液体蒸发所造成的产物的丢失。

第6题：

在固定容积的PCR反应体系中，加入越多的模版，PCR反应的效果就会越好。（）

正确答案:错误

第7题：

影响PCR反应的因素有哪些？

正确答案:PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。

第8题：

PCR反应的过程包括

A、变性

B、预杂交

C、退火

D、延伸

E、连接

参考答案：ACD

第9题：

RT-PCR是（）。

A、包括反转录反应
B、PCR的模板是mRNA
C、可以进行基因表达定量分析
D、PCR的模板是cDNA
E、不需要DNA聚合酶

正确答案:A,C,D

第10题：

何谓PCR，包括哪些步骤？

正确答案: PCR即聚合酶链反应，是一种特异性的体外DNA序列扩增技术，即以目的基因为模板，在寡核苷酸引物和4种脱氧核糖核酸存在的条件下，依赖DNA聚合酶的酶促合成反应。
PCR包括3个步骤：
①变性：通过加热使DNA双螺旋结构解离成单链DNA。
②退火：在变性后突然使温度降低，使引物与其互补的模板形成杂交链：
③延伸：在DNA聚合酶和4种脱氧核糖核酸及Mg²⁺存在的条件下，耐热的DNA聚合酶催化以引物为起点的DNA链的延伸。如此三步形成一个循环，每一次循环的产物又和原始模板一起作为下一个循环的模板。因此目的DNA产物是以几何级数增长的。

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