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说明PCR反应的基本原理并列举几种特殊的PCR方法。

题目
问答题
说明PCR反应的基本原理并列举几种特殊的PCR方法。
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相似问题和答案

第1题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用下列哪种PCR技术？( )

A、AP-PCR方法(arbitrarily primed PCR)

B、通用引物-PCR方法(general primer-mediated PCR，GP-PCR)

C、套式PCR(nested primers-polymerase chainreaction，NP-PCR)

D、多重PCR(multiplex PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)


参考答案：C

第2题：

简述PCR循环测序的基本原理。


本题答案：PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。
每个测序循环包括：
①PCR扩增制备的模板DNA变性成单链形式;
②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火;
③退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。
本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。
上述循环步骤重复20~40次，使链终止产物以线性方式获得扩增。

第3题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是

A、通用引物-PCR方法(general primer-media-ted PCR，GP-PCR)

B、多重PCR(multiplex PCR)

C、套式PCR(nested primers-polymerase chain reaction，NP-PCR)

D、AP-PCR方法(arbitrarily primed PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)


参考答案：C

第4题：

说明PCR的基本原理、PCR体系的基本组成及其作用。


正确答案:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
PCR反应的基本成分包括：模板DNA（待扩增DNA）、引物、4种脱氧核苷酸（dNTPs）、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

第5题：

最精确、最直观的检测HLA基因多态性的方法是

A.PCR-SSP
B.PCR-SBT
C.PCR-SSO
D.PCR-RFLP
E.PCR-SSCP

答案：B
解析：
考点：HLA基因多态性的检测方法。 PCR-SBT方法是一种通过对扩增后的HLA基因片段进行核酸序列测定，从而判断HLA基因多态性的方法，是最精确、直观的方法。

第6题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是

A、通用引物－PCR方法(general primermediated PCR，CJP－PCR)

B、多重PCR(multiplex PCR)

C、套式PCR(nestcd primers－polymerasc chain reaction，NP－PCR)

D、AP－PCR方法(arbitrarily primcd PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)


参考答案：C

第7题：

简述PCR基本原理。


本题答案：PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：
“高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环，获得大量扩增片段。

第8题：

关于聚合酶链反应(PCR)的叙述不正确的是( )。

A、PCR方法需要特定的引物

B、PCR技术是一种体外DNA扩增技术

C、PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内DNA的复制

D、PCR技术能够快速特异地扩增任何目的基因或DNA

E、PCR技术需要在恒温环境进行


参考答案：E

第9题：

PCR反应的产物中一般会生成几种长度不同的产物？


正确答案: PCR反应中一般会产生2种不同长度的产物：一种是预期长度的产物，一种是比预期长度长得多的产物；前者以指数级数增加（2的n次方），后者以几何级数增加（2n）。因此后者在总产物中所占比重很小，可忽略不计。

第10题：

提高PCR反应的特异性一般可以使用哪几种方法？


正确答案: A.引物设计：引物长度、碱基配对是否严格、GC%含量、退火温度、引物浓度与纯度、稳定性、是否为简并性引物等；
B.使用热启动：在变性完成之后再加入DNA聚合酶（或聚合酶才有活性），这样可以提高特异性，因为DNA聚合酶在低温时也有活性，可能引起非特异的扩增；
C.镁离子浓度：不同的模板和引物有不同的镁离子浓度，应进行预实验进行探索；较高的镁离子浓度会提高产量，同时降低特异性；dNTP浓度较高时应适当提高镁离子浓度；
D.促进PCR的添加剂：降低DNA熔解温度，从而有助于引物退火并辅助DNA聚合酶延伸通过二级结构区，可提高特异性和产率；
E.使用巢式PCR：降低扩增多个靶位点的可能性，提高特异性。

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