问答题何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。

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何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。

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相似问题和答案

第1题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是

A、通用引物－PCR方法(general primermediated PCR，CJP－PCR)

B、多重PCR(multiplex PCR)

C、套式PCR(nestcd primers－polymerasc chain reaction，NP－PCR)

D、AP－PCR方法(arbitrarily primcd PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)

参考答案：C

第2题：

能够进行细胞内定位的DNA扩增技术是()。

A、反向PCR技术

B、原位PCR技术

C、实时PCR技术

D、多重PCR技术

答案：B

第3题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是

A、通用引物-PCR方法(general primer-media-ted PCR，GP-PCR)

B、多重PCR(multiplex PCR)

C、套式PCR(nested primers-polymerase chain reaction，NP-PCR)

D、AP-PCR方法(arbitrarily primed PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)

参考答案：C

第4题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用下列哪种PCR技术？（）

A、AP-PCR方法（arbitrarily primed PCR）
B、通用引物-PCR方法（general primer-mediated PCR，GP-PCR）
C、套式PCR（nested primers-polymerase chainreaction，NP-PCR）
D、多重PCR（multiplexPCR）
E、原位PCR技术（in situ PCR，ISPCR）

正确答案:C

第5题：

试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。

正确答案: （1）引物的长度一般15～30bp；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定重要条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40%～60%为宜，A、T、G、C最好随机分布，避免5个以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4）避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补，特别是3′端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条物；
（5）引物3′端的碱基必须与模板严格配对，而且尽量不要为A，最好选择T，因为3′端末位为T时错配几率大大降低；
（6）产物有或能加上合适的酶切位点；
（7）被扩增的靶序列最好有适宜的酶切点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。

第6题：

简述PCR基本原理。

本题答案：PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：
“高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环，获得大量扩增片段。

第7题：

说明PCR的基本原理、PCR体系的基本组成及其作用。

正确答案:该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
PCR反应的基本成分包括：模板DNA（待扩增DNA）、引物、4种脱氧核苷酸（dNTPs）、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

第8题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用下列哪种PCR技术？( )

A、AP-PCR方法(arbitrarily primed PCR)

B、通用引物-PCR方法(general primer-mediated PCR，GP-PCR)

C、套式PCR(nested primers-polymerase chainreaction，NP-PCR)

D、多重PCR(multiplex PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)

参考答案：C

第9题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是（）

A、通用引物－PCR方法（general primermediated PCR，CJP－PCR）
B、多重PCR（multiplexPCR）
C、套式PCR（nestcdprimers－polymerasc chain reaction，NP－PCR）
D、AP－PCR方法（arbitrarily primcdPCR）
E、原位PCR技术（in situPCR，ISPCR）

正确答案:C

第10题：

何谓荧光实时定量PCR（RQ-PCR）技术？

正确答案: 荧光实时定量PCR（real-timequantitativePCR，RQ-PCR）技术即在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实的反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信号，从而实时监测整个PCR反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

何谓PCR？试述PCR技术的基本原理和影响因素。

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