问答题影响微生物原生质体制备的因素有哪些？

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影响微生物原生质体制备的因素有哪些？

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第1题：

原生质体培养有哪些常用方法？用哪些方法可以实现原生质体融合？

正确答案:培养方法可以分为固体培养法和液体培养法两大类，后来又由此派生出一些不同形式的原生质体培养方法。常用的有液体浅层培养法、固体平板法、悬滴培养法等。
原生质体融合有自发融合、诱导融合。其中诱导融合的方法有：硝酸钠法、多聚化合物法、高pH高Ca++法、聚乙二醇法、还有电融合等方法。

第2题：

影响原生质体制备的因素有哪些？

正确答案:菌体的预处理、菌体的培养时间、酶浓度、酶解温度与时间、渗透压稳定剂。

第3题：

影响原生质体分离效果的因素有哪些？试做分析。

正确答案: 供试材料的基因型和外植体。
酶解条件：酶质量、组合、浓度、pH、光照和温度、渗透压稳定剂质膜稳定剂。
分离条件：离心次数、离心速度、纯化方法、分离纯化持续时间、分离用具。

第4题：

固定化微生物原生质体发酵产酶有哪些特点？

正确答案:（1）变胞内产物为胞外产物：固定化原生质体由于解除了细胞壁的扩散障碍，可以使原本存在于细胞质中的胞内酶不断分泌到细胞外。变革了胞内酶的生产工艺。例如，笔者等人采用固定化黑曲霉原生质体生产葡萄糖氧化酶，使细胞内葡萄糖氧化酶的90%以上分泌到细胞外。
（2）提高酶产率：由于出去了细胞壁，增加了细胞的通透性，有利于氧气和其他营养物质的传递与吸收，也有利于胞内物质的分泌，可以显著提高酶产率。例如，笔者等人的研究表明，固定化枯草杆菌原生质体发酵生产碱性磷酸酶，使原来存在于细胞间质中的碱性磷酸酶全部分泌到发酵液中，产酶率提高30%。
（3）稳定性好：固定化原生质体由于有载体的保护作用，具有较好的操作稳定性和保存稳定性，可以反复使用或者连续使用较长时间，利于连续生产。
（4）易于分离纯化：固定化原生质体易于和发酵液分开，有利于产物的分离纯化，提高产品质量。

第5题：

影响微生物原生质体制备的因素有哪些？

正确答案: （1）菌体的预处理；
（2）菌体的培养时间；
（3）酶浓度；
（4）酶解温度；
（5）酶解时间；
（6）渗透压稳定剂。

第6题：

能够实现微生物菌种定向改造的方法是（）

A、紫外诱变
B、自然选育
C、制备原生质体
D、基因工程

正确答案:D

第7题：

影响原生质体再生的因素有（），（），（），（）。

正确答案:菌种特性；原生质体制备条件；再生培养基成分；再生培养条件

第8题：

原生质体制备方法

正确答案: ①G+菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶。
②G-菌原生质体获得：EDTA鳌合剂处理，溶菌酶。
③放线菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶。霉菌原生质体获得：纤维素酶。酵母菌原生质体获得：蜗牛消化酶。

第9题：

影响原生质制备的因素有哪些？

正确答案: 影响原生质制备的因素：
（1）菌体的预处理；
（2）菌体的培养时间；
（3）酶浓度；
（4）酶解温度；
（5）酶解时间；
（6）渗透压稳定剂。

第10题：

影响原生质体制备的主要因素有哪些？

正确答案: （1）菌体的前处理：如在细菌中加入EDTA等；
（2）菌体生理状态：一般在对数生长期胞壁对酶最为敏感；
（3）酶的浓度：一般来说，在一定浓度范围内，原生质体形成率随酶浓度增加而提高，酶浓度过低不利于原生质体形成，但酶浓度过高则导致原生质体再胜率下降；以原生质体形成率和再生率之积达到最大时的酶浓度作为最适酶浓度；
（4）酶解温度：温度对酶解作用和原生质体的再生均发生重要影响，处理时的最适温度应考虑这两方面的结果，常用的酶解温度为20~40℃；
（5）酶解时间：酶解时间过短，原生质体形成不完全，影响融合；酶解时间过长，原生质膜受到损伤，会出现原生质球坡烈失活，再生率下降，影响融合；
（6）渗透压：等渗透压可免除原生质体的膨胀破裂，还有助于酶和底物的结合。

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