影响PCR反应的因素有哪些?

题目
问答题
影响PCR反应的因素有哪些?
参考答案和解析
正确答案: PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液,这些因素都对PCR反应产生影响。
解析: 暂无解析
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第1题:

荧光定量PCR结果中样品的Ct值受下列哪些因素的影响()。

  • A、阈值设定
  • B、模版的起始浓度
  • C、PCR反应的循环数
  • D、引物的扩增效率

正确答案:A,B,D

第2题:

影响PCR反应的因素有哪些?


正确答案:PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液,这些因素都对PCR反应产生影响。

第3题:

影响反应器压差的因素有哪些?


参考答案:1)原料过滤器破碎,杂质沉积在床层顶部;2)催化剂装填质量不好,疏密不均;3)氢分压低,催化剂结焦;4)炉管结焦后,焦带入反应器;5)反应温度高,催化剂结焦;6)升降压速度快,催化剂破碎;7)氢压机安全阀跳,氢气倒流.

第4题:

PCR反应平台期的影响因素有()。

  • A、引物及dNTP底物浓度降低
  • B、产物过多
  • C、酶与模板比例下降
  • D、dNTP用完
  • E、反应时间过长

正确答案:A,C

第5题:

影响PCR结果的因素有哪些?


正确答案: (1)引物及浓度:①长度:15~30bp。②碱基:G+C含量以40%~60%为宜,ATGC最好随机分布,避免5个以上的碱基成串排列。③避免引物内部出现二级结构、两条引物间互补,特别是3′端的互补。④引物3′端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对。⑤与其它序列无明显同源性。⑥浓度为0.1~1μmol或10~100pmol。
(2)酶及其浓度:催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100μl时),浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少。
(3)dNTP的质量与浓度:dNTP应为50~200μmol/L,4种dNTP的浓度要相等(等摩尔配制),过高dNTP能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低。
(4)模板:模板的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,避免DNA纯化中的SDS和蛋白酶K等杂质。
(5)Mg2+浓度:一般的PCR反应中,各种dNTP浓度为200μmol/L时,Mg2+浓度为1.5~2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高,反应特异性降低,出现非特异扩增,浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性,使反应产物减少。
(6)温度与时间:①变性:93℃~94lmin℃,过高或过低的温度影响酶的活性。②退火:取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度。一般高于Tm值5℃~10℃,时间为30~60s。③延伸:常用温度为72℃,时间根据待扩增片段的长度而定。
(7)循环次数:主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30~40次,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之增多。

第6题:

酰胺化反应影响因素有哪些?


正确答案:①体系中存在水。②原材料浓度或质量。③原物料配比。④反应温度和停留时间。

第7题:

影响反应深度的因素有哪些?


正确答案: (1)反应温度升高,深度变大。
(2)催化剂活性提高,深度增大。
(3)原料油性质变化。
(4)循环氢纯度提高,深度增大。
(5)反应压力增大,深度增大。
(6)反应空速增大,深度减小。

第8题:

影响药物合成工艺的反应条件和影响因素有哪些?


正确答案: 配料比与反应物浓度、溶剂、催化、能量的供给、反应时间及反应终点的监控、后处理、产品的纯化和检验。

第9题:

影响PCR扩增平台期的因素有哪些?


正确答案: (1)引物及dNTP底物浓度降低;
(2)酶与模板比例下降。

第10题:

影响抗原抗体反应的因素有哪些?


正确答案:①抗原:抗原的理化性状、抗原表位的种类和数目。
②抗体:特异性和亲和力、抗体来源、效价。
③电解质:常用0.85%氯化钠溶液或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液。
④酸碱度:抗原抗体反应一般以pH6~9为宜。
⑤温度:抗原抗体反应温度常以15~40℃为宜,最适温度为37℃。