简述蛋白质盐析的基本原理.

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问答题
简述蛋白质盐析的基本原理.
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相似问题和答案

第1题:

简述蛋白质盐析的基本原理.


正确答案:蛋白质是亲水胶体,维持蛋白质胶体溶液稳定的重要因素有两个,一个是蛋白质颗粒表面大多为亲水基团,可吸引水分子,形成颗粒表面水化膜,使其溶解在水溶液中;另一个是同种蛋白质胶粒表面带有同种电荷,电荷的相互排斥作用使蛋白胶体颗粒最大限度分散在溶液中。以上两个原因可起到胶粒稳定的作用,使蛋白质颗粒难以相互聚集从溶液中沉淀析出。如去除蛋白质胶粒的上述两个稳定因素时,可使蛋白质易从溶液中析出,在蛋白质分离中的盐析和丙酮沉淀直接依据这一原理。蛋白质分子可呈两性解离,其电离过程和带电状态决定于其等电点和溶液的pH值。蛋白质在等电点的溶液中溶解度最小。盐析:在蛋白质溶液中加入大量中性盐,可破坏蛋白质在水溶液中的稳定性因素(水化膜和电荷),使蛋白质从溶液中沉淀析出。调溶液的pH值为蛋白质等电点更有利于盐析。

第2题:

简要说明蛋白质电泳法、透析法、超速离心法和盐析法的基本原理。


正确答案: ①电泳法的基本原理:在同一pH溶液中,由于各种蛋白质所带电荷性质和数量不同,分子量大小不同,因此它们在同一电场中移动的速率不同,利用这一性质可将不同蛋白质从混合物中分离开来。
②透析法的基本原理:蛋白质胶体的颗粒很大,不能透过半透膜。利用这一特性,可将混杂有低分子物质的蛋白质溶液放于半透膜袋内,以除去低分子物质、纯化蛋白质。
③超速离心法的基本原理:不同蛋白质分子量大小不同,分子形状不同,在一定的离心力场作用下沉降速率不同,故可利用此特性分离不同的蛋白质。
④盐析法的基本原理:各种蛋白质的亲水性及所带电荷均有差别,因此不同蛋白质盐析时所需盐类浓度不同。利用此—特性,逐步增加中性盐浓度使蛋白质从溶液中分段析出而分离。

第3题:

蛋白质盐析的原理是


正确答案:D
在蛋白质溶液中加入大量的硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐,可破坏蛋白质的水化膜和同种电荷,使蛋白质颗粒相互聚集,发生沉淀,所以6题答案为D。 

第4题:

通常,在蛋白质盐析时,般粗提蛋白质时,常用()分级盐析法;进一步分离、纯化用()分级盐析法。


正确答案:Ks;β

第5题:

简述盐析法分离蛋白质的特点


正确答案: 优点:经济、安全、操作简便、应用范围广;
缺点:盐析法分辨率不高。

第6题:

简述DNA-蛋白质亲和层析法的基本原理。


正确答案:该法的基本原理是根据序列特异性DNA结合蛋白与其特异的DNA结合序列的可逆性结合作用,以特异DNA序列作为配体,用层析方法将蛋白质分离纯化。

第7题:

简要说明盐析法的基本原理


正确答案: 盐离子与水分子作用,原来溶液中大部分的自由水转变为盐离子的水化水,从而降低蛋白质极性基团与水分子之间的作用,破坏蛋白质分子表面的水化层,暴露出来的蛋白质表面疏水性区域相互结合,形成沉淀。

第8题:

简述盐析原理,现以蛋白质为例


正确答案: 高浓度的中性盐溶液中存在大量的带电荷的盐离子,他们能中和蛋白质分子的表面电荷,使蛋白质分子间的静电排斥作用减弱甚至消失而能相互靠拢,聚集起来。
中性盐的亲水性比蛋白质大,它会抢夺本来与蛋白质结合的自由水,使蛋白质表面的水化层被破坏,导致蛋白质分子之间的相互作用增大而发生聚集,从而沉淀析。

第9题:

以硫酸铵为例简述蛋白质盐析沉淀的方法。


正确答案: 低离子强度下的盐溶
向蛋白质的纯水溶液中加入电介质后,蛋白质的活度系数降低,蛋白质将吸附盐离子,带电表层使蛋白质分子间产生相互排斥作用,蛋白质分子与水分子间相互作用加强,导致蛋白质的溶解度增大,发生盐溶;
高离子强度下的盐析
溶液主体中那些与扩散层反离子电荷符号相同的电解质离子将把反离子压入(排斥)到双电层中,使蛋白质表面的双电层厚度降低,静电排斥作用减弱;同时,由于盐的水化作用,特别是中性盐的亲水性大,其将争夺蛋白质水化层中的水分子,使蛋白质表面疏水区脱去水化膜而暴露,增大它们之间的疏水性作用而容易发生凝集,进而沉淀。

第10题:

简述蛋白质免疫印迹法的基本原理和主要操作步骤。


正确答案: 蛋白质印迹法又称蛋白质免疫印迹法,是20世纪70年代末80年代初在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展起来的蛋白质检测技术,为检测样品中是否存在蛋白质抗原提供了一种可靠的方法。该法鉴定蛋白质的原理是根据被测蛋白能与特定抗体的结合特性和该蛋白的相对分子质量。
免疫印迹法程序可分为5个步骤:
(1)蛋白样品的制备;
(2)经过SDS-PAGE分离样品;
(3)分离的蛋白转移到膜载体上,转移后首先将膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附;
(4)用固定在膜上的蛋白质作为抗原,与对应的非标记抗体(一抗)结合;
(5)洗去未结合的一抗,加入酶耦联或放射性同位素标记的二抗,通过显色或放射性自显影法检测凝胶中的蛋白成分。