有关双脱氧末端终止法序列分析描述正确的是()。

题目
多选题
有关双脱氧末端终止法序列分析描述正确的是()。
A

原理等同化学降解法

B

在体外进行了DNA的合成

C

引物标记是关键

D

类似原理用于了DNA序列自动化分析

E

得到特异的ddNTP末端片段是关键

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第1题:

有关化学降解法测序描述正确的是()。

  • A、借助于双脱氧末端终止法
  • B、进行了DNA的延伸
  • C、进行了碱基的特异修饰和化学降解
  • D、序列上每个碱基都须标记
  • E、电泳分离步骤可省略

正确答案:C

第2题:

简述利用双脱氧末端终止法(Sanger法)测定DNA一级结构的原理与方法?


正确答案: 原理是采用核苷酸链终止剂—2,,3,-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH,一旦参入到DNA链中,此DNA链就不能进一步延长。根据碱基配对原则,每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时,就有两种可能性,一是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止;二是参入dNTP,使DNA链仍可继续延长,直至参入下一个ddNTP。根据这一方法,就可得到一组以ddNTP结尾的长短不一的DNA片段。
方法是分成四组分别为ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后,聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。

第3题:

与Sanger双脱氧末端终止法相比,Maxam-Gilbert化学裂解法最明显的优点是

A、不需要加入2',3'-双脱氧核苷三磷酸底物

B、不需要DNA聚合酶的参与

C、不需要进行同位素标记

D、所测序列来自酶促反应的拷贝

E、所测序列来自原DNA分子本身


参考答案:E

第4题:

双脱氧核苷酸末端终止法


正确答案:在DNA合成反应体系中,除含有正常脱氧核苷三磷酸底物外,还加入少量的双脱氧核苷三磷酸(ddNTPs)特殊底物,由于这种底物的5′-磷酸基团是正常的,能够替代相对应的脱氧核苷三磷酸而与引物延伸链的3′羟基连接,进入部分新合成链;但由于这种特殊底物不存在3′羟基末端,故下一个核苷酸底物不能通过5′-磷酸基团与之形成3′,5′-磷酸二酯键,从而导致DNA新链的延伸提前终止于这一“异常”核苷酸处,而掺入的双脱氧核苷三磷酸则位于DNA延伸链的最末端。

第5题:

SANGER双脱氧链终止法的原理是什么?


正确答案: DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键连接,合成DNA所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP与普通dNTP不同,它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中,但由于没有3’羟基,不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键,因此,正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP,链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争,产物是一系列的核苷酸链,其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离。在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP,结果将产生4组寡核苷酸,它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置。

第6题:

链末端终止法是目前最通用的DNA测序技术,应掌握其基本原理、主要步骤和体系组成,并熟悉其特点。对于未知序列测序,链末端终止法的测序引物为()

  • A、其亚克隆载体序列的随机引物
  • B、其亚克隆载体序列的定向引物
  • C、其亚克隆载体序列的待测引物
  • D、其亚克隆载体序列的通用引物
  • E、其亚克隆载体序列的双链引物

正确答案:D

第7题:

双脱氧合成终止法测DNA序列时,加A体系中所得到的DNA片段都是以哪个核苷酸结尾()。

  • A、A
  • B、C
  • C、G
  • D、T
  • E、U

正确答案:A

第8题:

有关非依赖ρ因子终止转录的描述哪项是错误的( )

A、终止子含有反向重复序列

B、转录产物5′末端有密集的U

C、茎环结构改变RNA聚合酶的构象

D、转录产物的3′末端可形成茎环结构

E、茎环结构可使不稳定的杂化双链更不稳定


参考答案:B

第9题:

双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于()

  • A、DNA的聚合反应
  • B、DNA的连接反应
  • C、DNA的降解反应
  • D、特殊的DNA连接酶
  • E、聚合单体2’和5’位的脱氧

正确答案:A

第10题:

DNA双脱氧末端终止法中,DNA链延伸-终止反应的关键是()。

  • A、DNA模板变成单链
  • B、加入某一种带有标记的dNTP
  • C、加入一对引物
  • D、有ddNTP底物的存在
  • E、加入EDTA终止酶活性

正确答案:D

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