问答题简述RNA提取方法及其注意事项。

题目

问答题

简述RNA提取方法及其注意事项。

参考答案和解析

正确答案：由于RNAase的影响，为获得完整的基因RNA分子，必须在总RNA分离纯化的最初阶段，尽可能地灭活胞内RNAase的活性，因RNAase非常稳定，可降解标本中的RNA，许多组织和细胞中都含有活性很高的RNAase，因此在纯化RNA的过程中要保证无RNAase污染。选择性地使用针对RNAase的蛋白质变性剂、蛋白水解酶和能与蛋白质结合的阴离子去污剂，并联合使用RNAase的特异性抑制剂能极大地防止内源性RNAase对RNA的水解。提取RNA的方法有硫氰酸胍分离法等。

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第1题：

简述反义RNA技术及其调节基因表达的主要机理。

正确答案: 反义RNA（antisense RNA）是一类自身没有编码功能，但能通过配对碱基间氢键与目的RNA特别是mRNA的特定区域补结合，从而抑制基因表达的小分子RNA。一般将自然存在或人工合成的反义RNA，通过基因重组反向插入到表达载体，以此转染细胞、在细胞内产生大量反义RNA。
其作用机理包括：
（1）与引物RNA结合或作用于引物前体，阻止引物与DNA结合，抑制DNA复制；
（2）在转录水平或转录后加工过程中，阻止特定基因转录，或与mRNA5’端结合，阻止加帽过程；或与剪接位点结合，阻止mRNA的剪接形成等；
（3）与SD序列或编码区关键点如AUG结合，阻止mRNA与核糖体结合，阻断翻译等。

第2题：

简述药材提取液进行皂苷溶血试验的注意事项。

正确答案: 中药提取液中的其他成分也有溶血作用，如某些植物的树脂、脂肪酸、挥发油等。鞣质则能凝集血红细胞而抑制溶血。因此，要判断是否由皂苷引起溶血除进一步提纯后再进行试验外，还可以结合胆甾醇沉淀法，如沉淀后的滤液无溶血现象，而沉淀分解后有溶血活性，则表示确系由皂苷引起的溶血现象。

第3题：

简述法医物证检材提取的注意事项。

本题答案：不损失，不污染，不破坏检材的可检材性为基本原则。
①提取者必须戴手套持洁净器具，禁止用手直接触摸检材;
②检材附着于小件易携带物品，应整件提取;附着于大件不易携带物品，提取附着检材的部位;
③根据检材附着载体特性，应用剪切、刮削、擦试、吸敷、浸泡、锯凿、挖取等方法提取;
④不同部位的检材应分别提取;
⑤从各种载体上提取检材，均应提取检材附近材料作空白对照;
⑥提取的新鲜体液应取部分尽快检验，其余部分应制成纱布斑痕;应在阴凉通风处自然干燥成斑痕，切勿加热烘干或晒干;
⑦人体组织应干燥或冷冻保存或浸泡于75%乙醇中;
⑧对提取的检材应逐个做好详细记录和标签。

第4题：

简述RNA的制备方法。

正确答案:称4g干酵母粉置l00mL烧杯中，加入40mL0.2%NaOH溶液，沸水浴上加热30min，搅拌，然后加入数滴乙酸溶液使提取液呈酸性（用石蕊试纸检查），以4000r/min离心10～15min。取上清液，加入30mL95%乙醇，边加边搅拌。静置，待RNA沉淀完全后，用布氏漏斗抽滤。滤渣先用l0mL95%乙醇洗涤2次，再用l0mL无水乙醚洗涤2次，洗涤时可用细玻棒小心搅拌沉淀，用布氏漏斗抽滤。沉淀在空气中干燥，即得RNA。

第5题：

RNA的提取方法主要有（）提取和（）提取。

正确答案:稀盐溶液提取；苯酚水溶液提取

第6题：

简述真核生物RNA聚合酶的类型及其转录产物。

正确答案:RNA聚合酶Ⅰ，转录产物为45SrRNA；
RNA聚合酶Ⅱ，转录产物为hnRNA；
RNA聚合酶Ⅲ，转录产物为5SrRNA、tRNA、snRNA。

第7题：

简述二氧化碳灭火机的灭火原理，灭火器的结构、使用方法及其注意事项？

正确答案: 二氧化碳灭火原理：二氧化碳灭火剂是一种具有一百多年历史的灭火剂，价格低廉，获取、制备容易，其主要依靠窒息作用和部分冷却作用灭火。二氧化碳具有较高的密度，约为空气的1.5倍。在常压下，液态的二氧化碳会立即汽化，一般1kg的液态二氧化碳可产生约0.5立方米的气体。因而，灭火时，二氧化碳气体可以排除空气而包围在燃烧物体的表面或分布于较密闭的空间中，降低可燃物周围或防护空间内的氧浓度，产生窒息作用而灭火。另外，二氧化碳从贮存容器中喷出时，会由液体迅速汽化成气体，而从周围吸引部分热量，起到冷却的作用。

第8题：

简述RNA的种类及其主要作用。

正确答案: ⑴信息核糖核酸（mRNA）
把DNA上的遗传信息准确无误地转录下来。把RNA的遗传信息准确无误地翻译成蛋白质的氨基酸语言。
⑵核糖体核糖核酸（rRNA）
rRNA是组成核糖体的主要成分，核糖体为多肽链的装配提供了场所。核糖体包括两个大小不同的亚基。
小亚基连接着mRNA密码链，主要用来识别mRNA的起始密码子AUG。大亚基含有肽基转移酶（肽基合成酶）能把氨基酸连接成肽链，同时还为两个tRNA分子提供两个结合部位，即氨酰基部位和肽基部位。
⑶转运核糖核酸（tRNA）
大约含有80个左右核苷酸，而且除了四种普通的碱基（A、U、G、C）以外，还含有相当数量的稀有碱基，如假尿嘧啶核苷（ψ）、次黄嘌呤核苷（I）和甲基化的嘌呤和嘧啶。tRNA分子中的稀有碱基由于无法配对，所以形成突环而把基因暴露出来，从而使rRNA能够识别mRNA、核糖体以及氨基酸活化酶。识别密码子、携带特定的氨基酸到核糖体，指导蛋白质的合成。

第9题：

简述多功能提取器的功能及其特点。

正确答案:可提供药材水提取、醇提取、提取挥发油、回收药渣中的溶剂等，并能适用于渗漉、温浸、回流、循环浸渍、加压或减压浸出等工艺。

第10题：

简述力量锻炼的方法及其注意事项？

正确答案: 提高力量的方法：动力性力量练习；渐进负重练习法；静力性力量练习。
注意事项：
一是负荷大小根据自己实际水平选择，不论采用何种负荷，都要遵循循序渐进原则，避免突然增大负荷造成运动损伤。
二是动作速度与负荷大小有关，阻力大速度慢，在选择适宜负荷时尽量加快速度。
三是发展肌肉力量应隔日锻炼效果为好，但每次练习时应使肌肉有疲劳感。

简述RNA提取方法及其注意事项。

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