简述定量PCR的测定原理和方法。

题目

简述定量PCR的测定原理和方法。

参考答案和解析
正确答案:荧光标记技术是分子生物学最常用的标记技术,荧光染料或荧光标记物与扩增产物结合后,被激发的荧光强度和扩增产物成正比。而根据扩增原理,扩增是呈指数增长,因此在反应体系和反应条件完全一样下,样本含量应与扩增产物的对数成正比,故在一定的条件下荧光强度和样本含量成正比。
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相似问题和答案

第1题:

定量PCR与定性PCR测定原理的最主要区别点在于前者的测定点在PCR的指数扩增期,而后者多为扩增平台期。()

此题为判断题(对,错)。


答案:正确

第2题:

简述两种相对密度测定方法的原理和应用范围。


正确答案: 《中国药典》中收载了两种测定相对密度的方法,比重瓶法和韦氏比重秤法。液体或半固体中药制剂的相对密度的测定,一般采用比重瓶法,若样品易挥发且数量足够时,可用韦氏比重秤法。

第3题:

下列检测方法中可以准确定量测定原始mRNA拷贝数的是

A、RNA分子杂交

B、DNA分子杂交

C、ASO

D、PCR-ASO

E、RT-PCR


参考答案:E

第4题:

简述聚合酶链反应(PCR)方法的原理和应用。


正确答案:PCR是体外DNA扩增技术,是利用耐热DNA聚合酶及天然复制螺旋结构的原理,使极微量DNA片断在短时间内通过变性、退火、延伸等循环周期扩增到106-107倍,达到极易检测DNA的敏感方法。具有高度敏感、操作简便、快速等特点。目前,此法已在医学中广泛应用,如病原体DNA检测,细胞因子、T细胞受体、免疫球蛋白及补体研究,肿瘤基因、遗传基因检测,遗传性疾病的产前诊断及DNA克隆、重组,基因工程等;但要选择适当的阳性和阴性对照,以排除假阴性和假阳性。

第5题:

解释PCR、DNA—PCR、RT—PCR、原位PCR和定量PCR?


正确答案:(1)PCR是聚合酶链反应(Polymerase chain reaction)的英文缩写,是近年来发展起来的一种在体外特异扩增某一目的DNA片段的技术。
(2)DNA—PCR:以DNA为模板,扩增特定核苷酸序列。主要用于检测特定基因或DNA片段的存在,并常与核酸分子杂交结合,分析检定基因突变。
(3)RT—PCR:用提取的mRNA或总RNA(含有mRNA)为模板,通过逆转录扩增cDNA。是检测特定基因表达水平的主要方法之一,也是用于鉴别、诊断RNA病毒的重要技术。
(4)原位PCR:与原位杂交一样,原位PCR也无需提取DNA/RNA,直接用组织切片和细胞进行PCR或RT—PCR。它既能鉴定含有靶DNA/RNA序列的细胞,又能确定靶DNA/RNA序列在细胞内或染色体上的位置。
(5)定量PCR:PCR产物经凝胶电泳分离转移膜上,与放射性核素或化学发光标记的核酸探针杂交。根据放射自显影或化学发光后底板爆光的强弱,用密度计扫描定量。此法在基因诊断中应用甚广。

第6题:

以下哪一项不是HIV病毒载量测定常用的测定方法()。

A、反转录PCR系统

B、酶联免疫吸附试验

C、核酸序列依赖性扩增技术

D、实时荧光定量PCR扩增技术


答案:B

第7题:

简述进行测定的方法原理。


正确答案: 水样中定量加入稳定铯载体,在硝酸介质中用磷钼酸铵吸附分离铯,用氢氧化钠溶液溶解磷钼酸铵,在柠檬酸和乙酸介质中以碘铋酸铯沉淀形式分离纯化铯,以低本底β射线测量仪进行计数。

第8题:

简述PCR基本原理。


本题答案:PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制,在体外合成DNA链的方法,在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过:
“高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环,获得大量扩增片段。

第9题:

简述呼吸仪的测定原理和主要测定方法。


正确答案:呼吸仪可以测定活性污泥的呼吸速率,呼吸速率是单位时间单位体积的微生物所消耗的溶解氧的量。呼吸速率反映了活性污泥最重要的两个生化过程:微生物的生长和底物的消耗。呼吸仪也可成为BOD监测仪,但不要与BOD5相混淆,因为呼吸仪是在几分钟内使用适应废水性质的微生物来测定其所消耗的溶解氧的量。

第10题:

简述PCR的原理和引物设计原则。


正确答案:1.PCR又称聚合酶链反应,是一种在体特异性外扩增目的核酸的的酶促合成反应。其基本原理是:在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶存在的条件下,利用DNA半保留复制和其在不同温度下变性复性的特性,人为控制温度——高温变性,低温复性,室温延伸,循环多次后,特异性扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
2.引物设计原则是1. 长度为15~30个核苷酸2. 碱基随机分布,G+C的含量为45~55%
3.避免发夹结构的形成,引物的存在连续互补序列不超过3bp
4.引物之间不应存在互补序列,避免3 ′端互补重叠
5.引物的碱基序列与非扩增区域无同源性
6.引物3 ′端碱基一定与模板配对,最佳碱基选G和C ;
7.引物5 ′端可以修饰,如加酶切位点,突变位点,起始密码子,终止密码子等。