沉淀蛋白质的主要方法有几种？

题目

沉淀蛋白质的主要方法有几种？

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第1题：

普通沉淀池的主要类型有几种？

正确答案:按池内水流方向可分为平流式沉淀池、竖流式沉淀池和辐流式沉淀池。

第2题：

什么是沉淀法，简述沉淀蛋白质的几种主要方法的原理及应用。

正确答案:沉淀法：利用某种试剂使生物大分子沉淀，但不影响大分子结构的方法。
主要方法：
（1）中性盐沉淀（盐析法）：中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以在加入大量中性盐后，其夺走了水分子，破坏了水膜。同时又中和了电荷，破坏亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。
应用：除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。盐析法应用最广的还是在蛋白质领域。
（2）有机溶剂沉淀法：降低了水溶液的介电常数，减小了溶剂的极性。同时削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的相互作用，从而导致蛋白质溶解度降低而沉淀。除此以外，使带电溶质分子更易互相吸引而凝集，破坏了蛋白质的水化膜，从而发生沉淀。
应用：生化制备。
（3）选择性变性沉淀法：利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子与非目的生物大分子在物理化学性质等方面的差异，选择一定的条件使杂蛋白等非目的物质变性沉淀而得到提纯，称为选择性变性沉淀法。
应用：通常用于生物大分子分离纯化的初期，是分离纯化流程中附带进行的一个分离纯化步骤。
（4）等电点沉淀法：等电点沉淀法是利用具有不同等电点的两性电解质在达到电中性时溶解度最低，易发生沉淀，从而实现分离的方法。
应用：此法主要用于在分离纯化流程中去除杂蛋白，而不用于沉淀目的物。
（5）有机聚合物沉淀

第3题：

平流沉淀池的排泥有几种方法？

正确答案: ①斗底排泥：设有斗底的沉淀池，在斗底部设置闸门，利用静水压力来排泥
②穿空管排泥：穿空管排泥是一种较简易的排泥方法，它是利用沉淀池内的静水压力，做到无需排泥，管理较方便
③机械排泥：机械排泥有多种形式，效果一般都较好。在大、中型水厂中使用较多。机械排泥方法是连续排泥，沉淀池可做成平底，主要靠机械刮泥设备把底上积泥集中起来，再连续排走

第4题：

常用的蛋白质沉淀方法有哪些？有机溶剂沉淀蛋白质的机理什么？用乙醇沉淀蛋白质时应注意哪些事项？

正确答案: ①常用的蛋白质沉淀方法有：
蛋白质盐析沉淀、蛋白质等电点沉淀、有机溶剂沉淀法及运用沉淀动力学沉淀法等。
②有机溶剂沉淀蛋白质的机理是：
向蛋白质溶液中加入有机溶剂，水的活度降低。随着有机溶剂溶度的增大，水对蛋白质分子表面荷电基团的水化程度降低，液体的介电常数下降，蛋白质分子间的静电引力增大，从而凝聚和沉淀。
③用乙醇沉淀蛋白质时应注意的事项：
1、低温条件下操作可以提高收率和减少蛋白质失活变性（加入有机溶剂为放热反应）；
2、采用的有机溶剂必须与水互溶，与蛋白质不发生作用；
3、蛋白质分子量越大，需要加入的溶剂量越少；
4、一种蛋白质的溶解度常会因为另一种蛋白质存在而降低；
5、沉淀的蛋白如果不能再被溶解，可能已经变性；
6、很多酶和蛋白质在20-50%（V/V）就能产生沉淀；当溶剂量达到50%时，通常只有分子量≤1500的蛋白留在溶液中；
7、PH=PI时，需要加入的溶剂量减少；
8、盐析法沉淀的蛋白质采用有机溶剂精制时必须与先进行透析。

第5题：

常用沉淀蛋白质的方法有（）、（）、（）、（）和（）。

正确答案:盐析沉淀；有机溶剂沉淀；加热沉淀；重金属盐沉淀；生物碱试剂沉淀

第6题：

有机沉淀剂进行分离，主要几种方法？

正确答案:利用有机共沉淀剂进行分离，主要有以下三种方法：
1.利用胶体的凝聚作用进行共沉淀。
2.利用形成离了溶合物进行共沉淀。
3.利用“固体萃取剂”进行共沉淀。

第7题：

使蛋白质沉淀但不变性的方法有（）。

A、鞣酸沉淀蛋白
B、低温乙醇沉淀蛋白
C、重金属盐沉淀蛋白
D、常温乙醇沉淀蛋白

正确答案:B

第8题：

蛋白质沉淀有哪几类方法？主要基于哪种机理？

正确答案: 有中性盐盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂沉淀法，非离子型聚合物沉淀法，聚电解质沉淀法，金属离子沉淀法。
中性盐盐析法是基于在蛋白质溶液中加入中性盐后会压缩扩散双电层、降低电位，即中性盐即会使蛋白质脱水，又会中和蛋白质所带的电荷，使颗粒间相互排斥力失去，在布朗运动的相互碰撞下，蛋白质分子结合成聚集物而沉淀析出。
等电点沉淀法是基于不同蛋白质离子具有不同等电点这一特性（蛋白质在等电点时溶解度最小），用依次改变溶液pH值的办法，将杂蛋白沉淀除去。
有机溶剂沉淀法是基于加入有机溶剂后，会使水溶液的介电常数降低，而使蛋白质分子之间的静电引力增大，导致凝聚和沉淀。
非离子型聚合物沉淀法是基于体积不相容性。
聚电解质沉淀法是基于蛋白质与聚电解质结合形成一个多分子络合物，当络合物超过游离蛋白质的溶解度极限值使，就发生沉淀。
金属离子沉淀法是基于它们能与蛋白质分子中的特殊部位起反应造成的。

第9题：

蛋白质沉淀方法有哪些？

正确答案: （1）加入中性盐盐析
（2）加入可溶性有机溶剂
（3）将PH值调节到等电点
（4）加入非离子型亲水性聚合物
（5）加入聚电解质絮凝
（6）加入多价金属离子等

第10题：

什么是蛋白质的沉淀作用？有哪些沉淀蛋白质的方法？各方法沉淀的机理是什么？

正确答案: 蛋白质在水溶液中可形成亲水的胶体，蛋白质从胶体溶液析出的现象称为蛋白质沉淀作用。
沉淀蛋白质的方法有：
盐析法：在蛋白质溶液中加入高浓度的强电解质溶液如硫酸铵、硫酸钠等，蛋白质
从溶液中产生沉淀。
机理：破坏了蛋白质分子表面的水化膜和双电层（净电荷），蛋白质溶液失去
稳定性而产生沉淀。
有机溶剂沉淀法：乙醇、丙酮等有机溶剂可使蛋白质产生沉淀。
机理：降低溶液的介电常数，也破坏了蛋白质的水化膜，蛋白质产生沉淀，
但必须低温操作，以防止蛋白质的变性。
等电点沉淀法：用稀酸或稀碱调节蛋白质的溶液于某蛋白质等电点处，该蛋白质沉淀析出。
机理：中和蛋白质表面水化膜。
重金属沉淀法：蛋白质在等电点以上的pH下，易于重金属产生沉淀。
机理：重金属与带负电的蛋白质羧基结合产生不可逆沉淀。

沉淀蛋白质的主要方法有几种？

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