重组DNA的筛选与鉴定一般有哪四种方法？

题目

参考答案和解析

正确答案: ①平板筛选法。是指利用载体的遗传性标记在平板上直接筛选的方法。插入失活：当外源DNA序列插入质粒中某一抗药基因内，使该基因失活，转化细胞就不能生长在含相应抗生素的培养平板上.蓝-白筛选：利用蓝色化合物的形成作为指示剂，筛选带重组质粒的细菌。
②限制酶切图谱筛选。对载体上插入的外源DNA片段进行酶切图谱分析，并以此与目的基因的已知图谱对比，因此利用这种方法不仅能区分重组子与非重组子，而且还能鉴定目的重组子。
③PCR筛选重组体。抽取少量重组DNA→PCR扩增→电泳鉴定→序列分析
④原位杂交技术。1，获取DNA重组2，重组3，转化体4，筛选5，克隆6，表达7.表达产物分离纯化。

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第1题：

重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括：分（目的基因的分离）、切（限制性内切酶切割目的基因和载体）、接（目的基因和载体连接）、转（连接产物导入受体细胞）、筛（筛选阳性重组子）。将重组DNA导入大肠埃希菌最常用方法是A、磷酸钙共沉淀法

B、脂质体法

C、显微注射法

D、噬菌体感染

E、氯化钙法

重组DNA技术中最常用的筛选方法是A、标志补救筛选

B、插入表达筛选

C、抗性筛选

D、限制性内切酶酶切图谱分析

E、核酸分子杂交筛选

参考答案：问题 1 答案：E

问题 2 答案：C

第2题：

遗传基因工程的主要内容包括

A．载体和目的基因的分离

B．限制性内切酶的切割，并把载体和目的基因合成重组

C．DNA重组体的转化表达

D．DNA重组体的扩增、筛选与鉴定

正确答案：ABCD
解析：DNA克隆就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质——同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同——DNA分子，即DNA克隆。实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称重组DNA技术，又称基因丁程。一个完整的DNA克隆过程应包括：目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA分子导入宿主细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞(转化子)。

第3题：

DNA重组技术中，用来筛选重组体的方法有

A．标志补救

B．分子杂交

C．特异性抗体与产物结合

D．紫外分光光度计分析

正确答案：ABC

第4题：

重组DNA技术大致可以用以下几个字简单概括：分（目的基因的分离）、切（限制性内切酶切割目的基因和载体）、接（目的基因和载体连接）、转（连接产物导入受体细胞）、筛（筛选阳性重组子）。重组DNA技术中最常用的筛选方法是（）

A、标志补救筛选
B、插入表达筛选
C、抗性筛选
D、限制性内切酶酶切图谱分析
E、核酸分子杂交筛选

正确答案:C

第5题：

基因工程一般步骤（）。

A、目的基因的分离
B、目的基因与载体连接，组成重组DNA分子
C、目的基因阳筛
D、重组DNA分子输入受体细胞，筛选鉴定和无性系化，获得目的基因表达产品

正确答案:A,B,C,D

第6题：

系统分析你掌握的几种重组阳性克隆子的筛选和鉴定方法

参考答案：(1)根据重组子遗传重组表型改变的筛选法
1)利用抗生素抗性基因进行筛选
2)通过α互补使菌产生颜色来筛选
3)利用报告基因筛选克隆子
(2)根据重组子结构特征的筛选法
1)琼脂糖凝胶电泳比较重组DNA的大小
2)限制性内切酶分析
3)印迹杂交方法
4)PCR法
(3)根据目的基因表达产物采用免疫化学方法筛选。

第7题：

如何筛选与鉴定重组体？

正确答案: 鉴定
（1）报告基因的检测法
（2）目的基因分子杂交检测方法
筛选：
在利用载体间接转化外源基因或直接转化处理之后，大部分受体细胞是没有被转化的，这就需要采用特定的方法将转化细胞与未转化细胞区分开来。为了淘汰未转化的细胞，人们试验了各种不同的基因作为转化的报告基因（reporter gene），包括一些显性的选择标记基因，以及可用特定方法检测其蛋白质产物的基因。其中GUS基因和NPTII基因能耐受氨基末端融合、检测简单，是目前应用最多的报告基因。在植物基因工程中双子叶植物如番茄、辣椒、马铃薯的转化及部分单子叶植物的转化用NPTII基因所抗的卡那霉素（kanamycin）来筛选。

第8题：

常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括

A、α互补筛选

B、插入失活筛选

C、杂交筛选

D、质粒的小量快速提取

E、DNA序列测定筛选

参考答案：D

第9题：

鉴定DNA重组体的方法中，不需采用（）。

A、PCR鉴定
B、酶切鉴定
C、DNA序列测定
D、表达产物的鉴定
E、分光光度计测定

正确答案:E

第10题：

重组DNA技术包括（）

A、制备目的基因DNA片段
B、将目的基因与载体相连
C、将重组DNA导入受体细胞
D、筛选和鉴定DNA重组体
E、去除载体

正确答案:A,B,C,D

重组DNA的筛选与鉴定一般有哪四种方法？

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