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分离纯化酶有哪些常用方法，根据是什么？

题目

分离纯化酶有哪些常用方法，根据是什么？

参考答案和解析
正确答案: 酶的分离纯化工作主要是，将酶从杂蛋白中分离出来或者将杂蛋白从酶溶液中除去。现有的酶分离纯化方法都是依据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的。
1、根据分子大小而设计的方法，如离心分离法、筛膜分离法、凝胶过滤法等。
2、根据溶解度的大小分离的方法，如盐析法，有机溶剂沉淀法，共沉淀法，选择性沉淀法，等电点沉淀法。
3、按分子所带正负电荷的多少分离的方法，如离子交换分离法，电泳分离法，聚焦层析法等。
4、按稳定性差异建立的分离方法，如选择性热变性法，选择性酸碱变性法，选择性表面变性法等。
5、按亲和作用的差异建立的分离方法，如亲和层析法，亲和电泳法。
5.酶分子修饰的方法及意义
通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。
酶分子的修饰方法分为化学法、生物法和物理法。化学法又可分为金属离子置换法、肽链有限水解法、蛋白质侧链基团的小分子修饰法等。生物法是通过基因工程的手段改变蛋白质，即基于核酸水平对蛋白质进行改造，利用基因操作技术对DNA或mRNA进行改造和修饰，以期获得化学结构更为合理的蛋白质。物理法的特点是不改变酶的组成和基团，酶分子的共价键不发生变化。
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相似问题和答案

第1题：

中药有效成分的分离精制方法有哪些？最常用的方法是什么？


正确答案:中药有效成分的分离精制方法有：⑴ 溶剂法；⑵ 沉淀法； ⑶ 分馏法；⑷ 膜分离法；⑸ 升华法；⑹ 结晶法；⑺ 色谱法。最常用的方法是溶剂法和色谱法。

第2题：

分子筛层析纯化酶是根据（）进行纯化。

  • A、根据酶分子电荷性质的纯化方法
  • B、调节酶溶解度的方法
  • C、根据酶分子大小、形状不同的纯化方法
  • D、根据酶分子专一性结合的纯化方法

正确答案:C

第3题：

常用的蛋白质分离纯化方法有（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）、（）等。


正确答案:离心；透析；沉淀；层析；电泳；蛋白印迹；蛋白质芯片；质谱法

第4题：

酶的分离纯化技术有（）、（）、（）等。


正确答案:选择性沉淀技术；层析技术；膜分离技术

第5题：

选择分离纯化方法的依据是什么？


正确答案: 1.产物的位置（胞内/胞外）
2.产物与主要杂质的浓度
3.产物和主要杂质的物理、化学特性及差异
4.产品的用途和质量标准
5.产品的市场价格
6.废液的处理方法

第6题：

常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种？各自的原理是什么？


正确答案: 1、沉淀：向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出。
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析：A.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定pH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。B.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质，也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质因其密度与形态各不相同而分开。

第7题：

盐析法纯化酶类是根据（）进行纯化。

  • A、根据酶分子电荷性质的纯化方法
  • B、调节酶溶解度的方法
  • C、根据酶分子大小、形状不同的纯化方法
  • D、根据酶分子专一性结合的纯化方法

正确答案:B

第8题：

分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有哪些？它们的原理是什么？


正确答案: 分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有：离子交换色谱，疏水色谱，亲和色谱和凝胶过滤色谱；
离子交换色谱，以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子和交换剂上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法；
疏水色谱，利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异对蛋白质组分进行分离的色谱方法；
亲和色谱：利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质；
凝胶过滤色谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方法。

第9题：

根据溶解度不同，蛋白质有几种分离纯化方法。


正确答案: 利用蛋白质溶解度的差异是分离蛋白质的常用方法之一。影响蛋白质溶解度的主要因素有溶液的pH值、离子强度、溶剂的介电常数和温度等。
1）等电点沉淀蛋白质在等电点时溶解度最小。单纯使用此法不易使蛋白质沉淀完全，常与其他方法配合使用。
2）盐析沉淀中性盐对蛋白质胶体的稳定性有显著的影响。一定浓度的中性盐可破坏蛋白质胶体的稳定因素而使蛋白质盐析沉淀。盐析沉淀的蛋白质一般保持着天然构象而不变性。有时不同的盐浓度可有效地使蛋白质分级沉淀。通常单价离子的中性盐（NaCl）比二价离子的中性盐[（NH4）2SO4]对蛋白质溶解度的影响要小。
3）低温有机溶剂沉淀法在一定量的有机溶剂中，蛋白质分子间极性基团的静电引力增加，而水化作用降低，促使蛋白质聚集沉淀。此法沉淀蛋白质的选择性较高，且不需脱盐，但温度高时可引起蛋白质变性，故应注意低温条件。一般在0～40℃之间，多数球状蛋白的溶解度随温度的升高而增加；40～50℃以上，多数蛋白质不稳定，并开始变性。因此对蛋白质的沉淀一般要求低温条件。

第10题：

常用的微生物分离纯化方法有哪些？这些方法各有什么优缺？


正确答案: 常用的微生物分离纯化方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用，不需要特殊的仪器设备，分离纯化效果好稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间，缺乏溶氧而生长受影响，形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高，易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固，不能充分混匀。在微生物学研究中，更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。另一种简单快速有效的涂布平板法，为玻璃涂棒连续涂布分离法。平板划线分离法的特点是简便快速，但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的，需再重复划线1～2次，并结合显微镜检测个体形态特征，才可获得真正的纯培养物。

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