酶提取和分离纯化的方法有哪些？

题目

酶提取和分离纯化的方法有哪些？

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相似问题和答案

第1题：

以动物的组织为原料提取纯化酶时常常需要对动物材料进行预处理，常用的预处理的方法有（），（）和（）。

正确答案:机械处理；反复冻融；丙酮粉

第2题：

香豆素的提取分离方法有哪些？提取依据是什么？

正确答案:溶剂提取法（溶解性），碱提酸沉淀法（内酯环），水蒸气蒸馏法（挥发性），色谱法。

第3题：

挥发油的提取方法有哪些？分离方法有哪些？

正确答案: 挥发油的提取方法有水蒸气蒸馏法、溶剂提取法、吸收法、压榨法和二氧化碳超临界流体提取法。分离方法有冷冻析晶法、分馏法、化学分离法和色谱分离法。

第4题：

分离纯化酶有哪些常用方法，根据是什么？

正确答案: 酶的分离纯化工作主要是，将酶从杂蛋白中分离出来或者将杂蛋白从酶溶液中除去。现有的酶分离纯化方法都是依据酶和杂蛋白在性质上的差异而建立的。
1、根据分子大小而设计的方法，如离心分离法、筛膜分离法、凝胶过滤法等。
2、根据溶解度的大小分离的方法，如盐析法，有机溶剂沉淀法，共沉淀法，选择性沉淀法，等电点沉淀法。
3、按分子所带正负电荷的多少分离的方法，如离子交换分离法，电泳分离法，聚焦层析法等。
4、按稳定性差异建立的分离方法，如选择性热变性法，选择性酸碱变性法，选择性表面变性法等。
5、按亲和作用的差异建立的分离方法，如亲和层析法，亲和电泳法。
5.酶分子修饰的方法及意义
通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。
酶分子的修饰方法分为化学法、生物法和物理法。化学法又可分为金属离子置换法、肽链有限水解法、蛋白质侧链基团的小分子修饰法等。生物法是通过基因工程的手段改变蛋白质，即基于核酸水平对蛋白质进行改造，利用基因操作技术对DNA或mRNA进行改造和修饰，以期获得化学结构更为合理的蛋白质。物理法的特点是不改变酶的组成和基团，酶分子的共价键不发生变化。

第5题：

酶的分离纯化技术有（）、（）、（）等。

正确答案:选择性沉淀技术；层析技术；膜分离技术

第6题：

酶的提取方法有哪些？影响酶提取的主要因素有哪些？

正确答案:根据酶提取时所采用的溶剂或溶液的不同，酶的提取方法主要有盐溶液提取、酸溶液提取、碱溶液提取和有机溶剂提取等。
①盐溶液提取法：蛋白质在低浓度盐溶液中，其溶解度会随着盐溶液浓度的升高而增加，这种现象称为盐溶这是因为蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电表层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质分子与水分子间的相互作用却加强，因而溶解度提高。
②酸溶液提取法：有些酶在酸性溶液中的溶解度比较大，且比较稳定，这类酶宜采用酸溶液提取，PH一般控制在2—6，针对酶的性质选择合适的PH，避免PH过低引起酶失活。
③碱溶液提取法：有些酶在碱性溶液中的溶解度比较大，且比较稳定，这类酶宜采用碱溶液提取，PH一般控制在8—12，针对酶的性质选择合适的PH，避免PH过高引起酶失活。
④有机溶剂提取法：一些和脂类结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的酶蛋白难溶于水、稀盐、稀酸或稀碱中，则常用能够与水混溶的有机溶剂提取，如乙醇、丙酮、丁醇等。酶主要是蛋白质，影响蛋白质提纯的因素同样会影响酶的提纯，而在酶提取过程中最重要的就是要防止酶的变性失活。影响酶提取的最主要因素是酶在所用溶剂中的溶解度及酶向溶剂中扩散的难易。此外，在提取过程中还要注意一下因素的影响：
（1）温度：为防止酶的变性失活，提取时温度不宜过高。特别是采用有机溶剂提取时，整个提取操作应尽可能在低温下进行。
（2）PH：酶提取液的PH首先应保证蛋白质稳定，为了增加酶的溶解度，提取时溶液的PH应远离酶的等电点。（3）搅拌：搅拌能促进酶在提取液中的溶解，一般采用温和搅拌为宜，速度太快易产生大量气泡，增大了与空气的接触面，会引起酶蛋白的变性失活。
（4）污染：酶液是微生物生长的良好培养基，在提纯过程中应尽可能防止微生物对酶的破坏。
（5）提取液的体积：提取液的用量增加可提高提取率。但过量的提取液，使酶浓度降低，对进一步分离纯化不利。所以提取液的用量一般为含酶原料体积的3—5倍，少量多次，以得到较好的提取效果。

第7题：

在物质的分离纯化中，和其它方法相比，色谱法基本特点有哪些？

正确答案: 色谱学是一门以物理化学为基础的分离与纯化科学，与其他分离纯化法相比，它具有以下几个基本特点。
1）分离效率高色谱分离的效率之高是其他分离技术所无法相比的，尤其是细颗粒多孔球型的高效填料问世后，使色谱柱的柱效有更大的提高。每米可达几十万的理论塔板数。
2）应用范围广HPLC的应用范围之广也是其他分离技术无法相比的，从极性到非极性，离子型到非离子型，小分子到大分子，无机到有机及生物活性物质，以及其他热稳定性或热不稳定性的化合物，可以说无所不包。尤其是对生物样品的分离分析，是其他方法无法代替的。
3）操作参数多色谱的可变操作参数之多也是其他分离技术无法相比的。流动相可用气体、液体或超临界流体。在气、液、流体中又有许多不同的物质可选用。固定相可用液、固两大类。在加上流动相的pH值、离子强度、有机溶剂的含量、分离温度等参数的变化，使整个分离过程随着上述各种参数的变化适应于各种不同的样品分离的需要，应用于各种困难复杂的场合。
4）高灵敏度在线检测与其他分离手段相比，色谱具有高灵敏度在线检测的特性。根据不同的物理与化学的原理，HPLC具有不同的高灵敏度的检测器，适用于多种千差万别样品的需要。这些检测器不但稳定性好，信噪比高，同时都能进行连续的在线检测，及时掌握分离与纯化过程中的情况，保证在要求的纯度下得到最高的产率。
5）快速分离HPLC由于采用了高压溶剂传输系统，即使采用高效细颗粒填料，也能保证分离过程在一定的线速下进行，而且由于单位柱长的柱效提高，柱长可以大大缩短，更加快了分离的速度，从而可以提高单位时间的产量。
6）连续自动化操作电脑用于色谱分离过程以后，从最初的简单数据处理发展到目前作为控制操作的中心，使大量的样品可以按照事先设置好的程序进行完全自动连续的操作。
色谱法正是由于上述这些特点，在生物技术蓬勃发展、迫切需要有效的分离纯化方法的今天，人们还是认为色谱是最理想的也是最有发展前景的一种分离与纯化生物大分子的方法。

第8题：

以生物组织为原料提取纯化多肽和蛋白质，在选择分离纯化方法时应注意哪些问题？

正确答案:（1）根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质；
（2）根据蛋白质分子形状和大小的不同来纯化蛋白质；
（3）根据蛋白质溶解度的不同来纯化蛋白质；
（4）根据蛋白质电离性质的不同来纯化蛋白质；
（5）根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质；
（6）根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来纯化蛋白质；
（7）根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋白质；
（8）根据蛋白质选择性吸附性质来纯化蛋白质；
（9）根据蛋白质的某些特殊性质进行纯化。

第9题：

常用的微生物分离纯化方法有哪些？这些方法各有什么优缺？

正确答案: 常用的微生物分离纯化方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法、稀释摇管法、液体培养基分离法、单细胞分离法、选择培养分离法等。其中前三种方法最为常用，不需要特殊的仪器设备，分离纯化效果好稀释混合倒平板法有两个缺点，一是会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间，缺乏溶氧而生长受影响，形成的菌落微小难于挑取；一是在倾入熔化琼脂培养基时，若温度控制过高，易烫死某些热敏感菌，过低则会引起琼脂太快凝固，不能充分混匀。在微生物学研究中，更常用的纯种分离方法是稀释涂布平板法。另一种简单快速有效的涂布平板法，为玻璃涂棒连续涂布分离法。平板划线分离法的特点是简便快速，但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的，需再重复划线1～2次，并结合显微镜检测个体形态特征，才可获得真正的纯培养物。

第10题：

酶的分离纯化应注意的问题有哪些？

正确答案:根据溶解度变化的纯化方法较适宜于早期纯化阶段，规模较大；而柱层析法或电泳分离更适宜于后期的纯化过程，规模较小。某些价格昂贵的层析介质方法，只适用于纯化过程的最后几步。

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